论文部分内容阅读
流行病学研究表明,心血管系统疾病的发病率存在性别差异,绝经前女性心血管病的发病率低于男性,但绝经后男女无差异。提示,雌二醇对血管有保护作用,因此雌激素替代疗法一时间成为业界的研究热点。但是,几项临床研究表明,雌二醇在保护血管内皮完整性的同时能够使绝经期女性心血管发病率增加,并能导致乳腺癌、子宫内膜癌、深静脉栓塞等严重的副作用。医学家们设想：有没有一种物质既具有雌激素样效应而缺无雌激素不良反应或不良反应较少?研究者将目光投向了类雌激素样药物的寻求和研究方面。既往课题组研究证实,西洋参茎叶总皂苷具有一定保护血管效应,机制研究发现该药可以防止血管内皮过氧化损伤,抗动脉粥样硬化等。结合其大补元气的功效,基于中医元气的描述与雌激素作用具有某些相似性,推测西洋参可能具有类雌激素样作用。本研究首先观察了西洋参茎叶的有效组分(心悦胶囊)对绝经后女性冠心病(coronary heart disease, CHD)患者血清E2水平、血脂代谢、氧化应激、炎症和血管内皮功能的影响,并借助去势ApoE-/-小鼠模型观察了西洋参茎叶总皂苷对雌激素水平、雌激素效应及雌激素介导的信号转导通路PI3K/AKt关键蛋白表达的变化,探讨PQS是否具有类雌激素样血管保护作用,为PQS防治绝经后冠心病的临床应用提供实验和临床依据。本课题研究分为三部分：文献综述、临床研究和动物实验研究。1、文献综述：本部分分别从植物雌激素的心血管保护作用研究进展、雌激素受体介导的信号通路与心血管系统两个方面进行综述。2、临床研究：心悦胶囊对绝经后女性冠心病患者的血管保护效应研究目的：观察心悦胶囊对绝经后女性冠心病患者血管保护作用。方法：冠心病诊断参照1999年及2002年美国心脏病学会(ACC)／美国心脏协会(AHA)/美国医师学会及美国内科学会(ACP-ASIM)联合协定关于《慢性稳定性心绞痛诊疗指南》、《不稳定性心绞痛、无ST段抬高心肌梗死诊疗指南》。同时,绝经后期定义参照1999年国际绝经学会定义。选择80例绝经后女性CHD患者,随机分为两组：治疗组40例,在常规西药治疗基础上给予心悦胶囊治疗；对照组40例,采用常规西药治疗。以绝经后健康女性作为健康对照组30例。对照组和治疗组均于行冠状动脉造影前和用药12w后,清晨空腹抽取静脉血,分离血清。健康对照组于清晨空腹状态下抽取静脉血,分离血清。电化学发光法测定血清雌二醇含量,ELISA法测定血清NF-κB、sICAM-1、sE-selectin、NO、ET-1含量,生化法测定血清SOD活力、MDA含量。结果：与健康组相比,冠心病组血清雌二醇、SOD活力、NO含量和HDL-C明显下降,血清TC、TG、LDL-C、MDA、NF-κB、sICAM-1、sE-selectin和ET-1升高(P<0.01或P<0.05)。其中治疗组较对照组雌二醇水平、SOD活性及NO含量和HDL-C有上升趋势,而TC、TG、LDL-C、MDA.NF-κB、sICAM-1、sE-selectin和ET-1水平有下降趋势(P>0.05)。结论：绝经后女性冠心病患者雌二醇水平明显下降,心悦胶囊有提高雌二醇水平趋势,且对血管具有保护作用,其机制除了能够改善绝经后冠心病患者血脂代谢紊乱,主要还表现在对抗过氧化、抑制炎症反应以及调节血管舒缩状态三个方面。3、动物实验研究：西洋参茎叶总皂苷对去势ApoE-/-动脉粥样硬化雌性小鼠的血管保护作用及机制研究目的：观察西洋参茎叶总皂苷对去势ApoE-/-动脉粥样硬化雌性小鼠的血管保护效应及相应机制方法：采用高脂饲料喂养12w联合摘除卵巢建立去势ApoE-/-主动脉粥样硬化雌性小鼠模型,将造膜成功的去势ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠分为模型组、雌二醇组(E2组)、西洋参茎叶总皂苷组(PQS组)、雌二醇+雌二醇受体拮抗剂剂(氟维司群)组(EA组)、西洋参茎叶总皂苷+雌二醇受体拮抗剂剂(氟维司群)组(PQSA组)。将C57BL/6J(假手术组)雌性小鼠作为对照组,普通饲料喂养12w。除对照组和模型组灌服等体积的蒸馏水外,其余各组灌服和(或肌肉注射)相应药物。干预12周后,所有小鼠禁食12小时,麻醉,眼球取血,分离血清。取从肾动脉开口处到升主动脉段的主动脉,上端2cm用于常规HE染色,其余部分迅速冻于液氮中,2h后置于-80℃冰箱保存,用于western-blot和PCR检测。进行小鼠主动脉组织病理学观察,ELISA法测定血清17β雌二醇.NO、ET-1、NF-κB、E-selectin、 ICAM-1含量,生化法测定小鼠血清SOD、MDA含量。RT-PCR法测定主动脉iNOS和eNOS基因表达水平,Western-blot法检测小鼠主动脉p-Akt蛋白水平。结果：①组织病理学观察显示：模型组小鼠主动脉粥样硬化斑块含有大量泡沫细胞,PQS具有改善动脉粥样硬化的作用,该作用与E2相似。②生化指标检测显示：与对照组相比,模型组小鼠血清17β雌二醇和SOD活力明显下降,MDA、NF-κB、E-selectin、ICAM-1、NO、ET-1含量均升高(P<0.01或P<0.05)；与模型组相比,E2组和PQS组小鼠血清17β雌二醇和SOD水平明显升高,MDA、NF-κB、E-selectin、ICAM-1、NO、ET-1含量均明显减少(P<0.01或P<0.05)；而EA组小鼠血清17β雌二醇虽明显升高(P<0.01),但SOD活力、MDA、NF-κB、E-Selectin、ICAM-1、NO.ET-1与模型组相比无显著性差异(P>0.05)；PQSA组与EA组结果类似。③主动脉iNOS和eNOS基因表达检测显示：与对照组相比,模型组主动脉iNOSmRNA表达显著升高(P<0.01), eNOSmRNA表达显著降低(P<0.01)；与模型组相比,E2组和PQS组iNOSmRNA表达显著降低(P<0.01或P<0.05),eNOSmRNA表达显著升高(P<0.01或P<0.05),而EA组和PQSA组主动脉iNOSmRNA、eNOSmRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05)。(?)p-Akt蛋白检测显示：与对照组相比,模型组小鼠主动脉p-Akt蛋白表达均明显减少(P<0.01)；与模型组相比,E2和PQS组p-Akt蛋白表达均明显升高(P<0.01或P<0.05),而EA组与PQSA组p-Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论：去势ApoE-/-动脉粥样硬化雌性小鼠雌激素水平下降明显,且脂质代谢紊乱,炎症因子高表达,而西洋参茎叶总皂苷具有提高血清17β雌二醇水平、改善脂质代谢紊乱、减轻氧化应激反应及抑制炎症反应及促进Akt蛋白磷酸化等作用,该作用可以被雌激素受体阻断剂阻断,说明西洋参茎叶总皂苷的上述作用主要通过雌激素与受体结合途径实现的。