【摘 要】
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无基质的血红蛋白需要通过修饰增加分子量或者分子半径后才能被用于临床输血中。其中通过交联剂聚合来增加分子量是目前最受关注的一种血红蛋白氧载体的制备方式。然而聚合产物中的未聚合的血红蛋白分子(64k D)经过研究会带来严重的毒性,除了其自身在生理溶液中会解聚为32k D的αβ二聚体产生肾毒性外,还有相关研究证明血红蛋白分子(64k D)会引起血管收缩,引发高血压,因此目前所有产业化的血红蛋白氧载体都在
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无基质的血红蛋白需要通过修饰增加分子量或者分子半径后才能被用于临床输血中。其中通过交联剂聚合来增加分子量是目前最受关注的一种血红蛋白氧载体的制备方式。然而聚合产物中的未聚合的血红蛋白分子(64k D)经过研究会带来严重的毒性,除了其自身在生理溶液中会解聚为32k D的αβ二聚体产生肾毒性外,还有相关研究证明血红蛋白分子(64k D)会引起血管收缩,引发高血压,因此目前所有产业化的血红蛋白氧载体都在尽力去除聚合产物中的血红蛋白分子(64k D)含量。为了确保血红蛋白氧载体在临床应用中不会因为血红蛋白分子(64k D)的存在而引起血压升高,本文通过增加聚合反应的粘度聚合的方法,将聚合反应中的血红蛋白分子(64k D)含量降低到一定范围内,利用制备的产物通过动物实验对血红蛋白氧载体引起高血压的原因进行了初步研究。在液相制备血红蛋白的过程中,首先利用80%的丙三醇来增加聚合反应的粘度,血红蛋白浓度为5mg/ml,控制血红蛋白和戊二醛的反应摩尔比为1:240,聚合反应的时间为50min,在聚合结束后需要用DMAB还原终止,通过增加粘度的方法制备的聚合血红蛋白将聚合产物中的血红蛋白(64k D)含量降至21%左右。在固相制备血红蛋白的过程中是利用阴离子树脂先通过静电吸附将血红蛋白固定,同时按照戊二醛与乙二醇的摩尔比为1:20制备缩醛,然后将缩醛加入饱和吸附血红蛋白的介质中,控制血红蛋白与戊二醛的摩尔比为1:300,聚合反应的时间为60min,聚合结束后用DMAB终止,并用1MNacl溶液将聚合产物洗脱下来,利用固相聚合的方法制备的聚合血红蛋白中血红蛋白分子(64k D)含量仅为1%。在研究不同性质的HBOCs对小鼠血压响应时,利用制备的氧亲和力不同的聚合血红蛋白和分子内交联的血红蛋白,通过Topload动物模型:即直接尾静脉注射的方法,向四组小鼠注射四种样品,并从注射开始,实时监测小鼠血压变化,注射了脱氧聚合血红蛋白的实验组鼠血压几乎不变,注射氧合聚合血红蛋白的实验组小鼠血压在注射中有略微升高,但波动范围在10%以内,注射脱氧和氧合的分子内交联的血红蛋白实验组小鼠血压升高从注射开始延续至60min后才恢复基础值,但整体波动范围也在10%左右。由以上实验得出的初步结论是血压升高与氧亲和力和血红蛋白分子(64k D)的含量均没有明显的相关性,但这可能与本次实验制备的样品浓度过低以及其他实验干扰因素有关,临床上引起血压升高的原因还需要进一步研究。
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