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lef-10基因作为苜蓿银纹夜蛾多核型多角体病毒(AcMNPV)的必需基因,其主要参与了病毒DNA的复制和晚期基因表达,属于晚期表达因子。在之前的研究中发现,LEF-10在大肠杆菌中能够形成高分子量的复合体并且这种复合体的存在是极其稳定的,而我们在Sf9细胞中也同样观察到了LEF-10在细胞质中形成的聚集体,这种聚集体对病毒的复制以及晚期基因的表达产生的影响,将是本实验研究的重点。本实验以p10启动子控制的mCherry作为报告基因,对宿主细胞中LEF-10的表达和分布情况以及mCherry的表达水平进行分析。实验发现当LEF-10均匀分布于细胞核中时,能够正常发挥其功能,使得极晚期基因正常表达,一旦LEF-10在细胞质中发生聚集,其不能进入到细胞核中,导致宿主细胞核中的LEF-10减少,不足以支撑某些晚期基因与极晚期基因的转录活动,从而使得极晚期启动子p10启动的mCherry表达量下降。我们根据这一结论,建立了LEF-10聚集对基因表达影响的模型。同时,我们发现LEF-101-65在自身启动子下表达量要稍低于野生型,它只能恢复全长LEF-10的部分功能。而为了进一步确定LEF-10的过量表达对LEF-10的聚集以及晚期基因表达的影响,我们根据截短型LEF-101-65的功能与野生型LEF-10相当,但不易在细胞中发生聚集的特点,分别构建了p10启动子下LEF-10和LEF-101-65过量表达的重组杆状病毒,在感染Sf9细胞后,对宿主细胞中LEF-10以及LEF-101-65的表达情况进行了分析并检测了某些晚期基因的表达水平,由于LEF-101-65在自身启动子下表达量要稍低于野生型,它只能恢复全长LEF-10的部分功能,发现由p10启动子启动的LEF-10的表达量要明显低于LEF-101-65的表达量,表明LEF-10的过量表达会导致极晚期基因p10的表达量下降。我们认为在LEF-10过量表达时,大量LEF-10在细胞质中发生聚集,病毒晚期基因以及极晚期基因的表达水平降低;而在LEF-101-65过量表达的宿主细胞中,则不会发生LEF-101-65的大量聚集,使得晚期基因以及极晚期基因的表达不受影响。为了验证这一观点,我们选取了五种晚期表达基因pp78/83,vp39,sod,odv-e56,vp-80并检测了其表达水平,进一步证实了上述观点。本实验通过构建LEF-10正常表达以及过量表达的重组病毒,验证了LEF-10在Sf9细胞中的聚集对晚期基因表达的影响,并由此构建了LEF-10的聚集与其功能的关系模型,为进一步研究LEF-10的功能奠定了基础,也为其他能形成复合物的蛋白的研究提供了新途径。