研究背景心肌肥厚是心脏在受到各种病理和生理刺激产生的适应性反应。持续的心肌肥厚引起心肌表型的变化,最终导致心力衰竭的发生。到目前为止,尽管许多在心肌肥大和心功能衰竭过程中起重要作用的信号通路以及细胞因子被鉴定,但心肌肥厚的发生机制尚未完全阐明。因此,寻找参与调控心肌肥厚的关键因子,揭示心肌肥厚的分子机制仍是研究热点。肌侵蛋白(myotrophin, MTPN)最初是从原发性高血压大鼠的心脏中分离得到的,蛋白分子量为12kD。许多的研究已证实肌侵蛋白参与了心脏肥厚的起始,并在心脏肥厚向心衰的发展过程中起重要作用。通过文献的复习和数据库的检索,提示肌侵蛋白基因3’-UTR的区域存在一个多态性位点rs17168525,被预测可能影响let-7/miR-98与MTPN的mRNA结合。值得注意的是,多态性位点rs17168525位于与let-7/miR-985’端种子序列结合的靶序列中。种子序列又是miRNA识别和结合特异性序列所必需的,而miRNA结合位点的基因变异影响miRNA与靶基因结合效率以及基因转录活性。因此,我们提出假设,rs17168525可能影响肌侵蛋白的表达,与左心室肥厚易感性相关联。研究目的阐明MTPN基因3’-UTR区域miRNA结合位点SNP位点rs17168525对MTPN基因翻译及蛋白表达的影响以及该SNP位点与高血压左室肥厚遗传易感性的关系,为左心室肥厚的分子机制提供新的线索。研究方法本研究分别构建携带rs17168525野生型和突变型的pMIR-REPORT重组载体,测序验证,提取转染用质粒,与let-7c的前体或阴性对照共转入Hela细胞,以海肾荧光素酶作为内参,采用双荧光素酶报告系统分析该SNP位点对MTPN基因转录活性的影响。利用western blot的方法检测let-7c对MTPN蛋白表达的影响。病例对照研究对象为河南信阳高血压基地收集的1,614例高血压患者,其中包括552例高血压伴左心室肥厚患者,1,062例高血压非左心室肥厚患者及591例健康对照者。所有入选者均进行心脏超声的检测。采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)法研究MTPN基因3’-UTR多态性(rs17168525)与原发性高血压继发左室肥厚遗传易感因素的关系。研究结果双荧光索酶报告实验结果显示,Let-7c能够显著抑制融合有MTPN基因多态性rs17168525野生型C位点的荧光素酶基因的表达(表达量降低41%,P<0.05),而不能抑制融合有MTPN多态性rs17168525突变型T位点的荧光素酶基因的表达。表明Let-7c能够作用于MTPN的3’非编码区,抑制MTPN的翻译活性。Western blot结果显示,转染Let-7c的心肌细胞肌侵蛋白表达水平明显下调。病例对照研究结果显示,MTPN基因的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。rs17168525基因型的分布频率在三组间无明显统计学差异(P>0.05)。在三种遗传模式下,Logistic回归模型分析结果MTPN基因SNP rs17168525与高血压左心室肥厚患病易感性不存在统计学差异。携带不同基因型者的心脏超声参数在三组间也无统计学差异。结论本研究表明MTPN基因多态性rs17168525可以通过影响与let-7/miR-98的结合从而影响肌侵蛋白的表达。进一步的研究需在不同遗传背景的人种中证实SNPrs17168525与左心室肥厚患病易感性的关系。研究背景动脉粥样硬化是冠心病最重要的病理基础。炎症导致血管局部中性粒细胞和单核细胞浸润,促进脂质沉积,导致动脉粥样硬化脂纹等早期病变的发生。单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)被认为是动脉粥样硬化形成早期的关键因素,与其特异性受体C-C类趋化因子受体2(CCR2)结合,促进单核细胞向受损的内皮细胞趋化、黏附,并迁移进入血管内膜下,活化为巨噬细胞,吞噬类脂质,形成泡沫细胞。动物试验证实,将小鼠的MCP-1或CCR2基因剔除,结果发现基因剔除小鼠阻碍了巨噬细胞的募集和阻止了动脉粥样硬化损伤的形成。MCP-1基因及其受体基因CCR2作为研究冠心病的候选基因,其基因多态性可能与冠心病的易感性相关。然而,MCP-1基因A-2518G及其受体CCR2基因V64I多态性与冠心病的相关性存在颇多争议。因此,该两种基因多态性与冠心病的发病具有怎样的关系,影响各研究结果异质性的因素有哪些,关键因素是什么,是目前迫切需要解决的问题。研究目的对MCP-1基因A-2518G及其受体CCR2基因V64I多态性与冠心病关系的研究结果进行综合定量评价,以期获得该两种基因多态性与冠心病发病风险之间的可靠证据。研究方法采用荟萃方法合并该两种基因的两个多态性位点与冠心病关联的OR值,结合95%的可信区间作为每个研究结果的研究效应测定指标。通过检索PubMed、 Embase、Web of Science数据库,入选2011年1月以前在公开刊物上发表的病例对照研究或队列研究作为荟萃分析的数据来源。各研究间进行一致性检验,以确定采用固定或随机效应模型进行合并分析。同时,应用亚组分析及敏感性分析寻找异质性的主要来源。研究结果共纳入20篇文献,总计9,844例冠心病患者,11,821例对照。荟萃分析结果显示：对于MCP-1基因A-2518G多态性,按不同种族人群分层,高加索人群A-2518G基因型GG/(GA+AA)通过随机效应模型进行合并分析,OR值为1.42(95%CI：1.06-1.92,P=0.02)。但是结果存在显著的异质性(异质性Chi2=24.38,I2=67.2%,P=0.002)。应用亚组分析来探索异质性的来源。亚组分析结果显示,按照冠心病临床表型(心肌梗死或冠脉狭窄),基因分型方法(限制性片段长度多态性聚合酶链式反应或其它方法)为界限分亚组,亚组间无统计学差异。而样本量(≥500,200-499,或<200)和基因型分布的Hardy-Weinberg遗传平衡检验(是或否)为结果异质性的来源。基于大样本关联研究结果的亚组,合并单等位基因的OR值为1.08(95%CI：0.85-1.37,P=0.54),且异质性消失(异质性Chi2=0.64,I2=0%,P=0.43)。样本量分别为200-499和<200的亚组,合并单等位基因的OR值分别为1.86(95%CI：1.06-3.25,P=0.03)和1.46(95%CI：0.82-2.62,P=0.20),三个亚组结果间的差异具有统计学意义(P=0.033)。分析结果检测出可能存在发表偏倚(Egger’s test,P=0.018)。东亚人群A-2518G基因型GG/(GA+AA)合并OR值为0.93(95%CI：0.73-1.17,P=0.52)。对于CCR2基因V64I多态性,V64I基因型Ⅱ/(Ⅵ+ⅤⅤ)合并OR值为1.27(95%CI：0.81-1.99,P=0.31),基因型(Ⅱ+Ⅵ)/ⅤⅤ合并OR值为1.06(95%CI：0.95-1.19,P=0.30)。发表偏倚评估P=0.538。结论荟萃分析结果表明,高加索人群单核细胞趋化蛋白1基因A-2518G位点和冠心病易感性之间存在弱阳性关联,可能由于存在发表偏倚和高估了小样本的关联结果。其特异性受体C-C类趋化因子受体2基因V64I多态性与冠心病无明显相关性。