循环肿瘤细胞的捕获及胞内雌激素受体检测探针的设计与合成

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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类健康[1,85]。近年来,随着生活水平的提高,乳腺癌已成为导致女性死亡的主要原因[2],每年全球新发病患者将近百万,而且其发病年龄呈年轻化趋势,肿瘤早期发现和诊断对肿瘤的治愈率至关重要。循环肿瘤细胞(Circulation tumor cells,CTCs)是导致肿瘤转移及复发的主要原因,存在于患者外周血中[3],随着血液循环进入身体各处。检测体内CTCs对于发现和预防肿瘤的发生有重要意义[82-84],一旦CTCs滞留在身体某处,在环境适合生长的条件下,易形成病灶[86]。肿瘤传统的诊断方法往往副作用大,造成身体的二次伤害,因此开发快速、高效、伤害小的诊断方法尤为必要。论文建立了一种基于留置针输液过程的CTCs在体捕获方法。这种方法的优点是:对CTCs的捕获不需要通过额外取血,在输液过程中就可以完成,对患者伤害较小,容易被患者接受,且灵敏度较高。本文设计并合成了一种可同时检测CTCs内两种雌激素受体亚型的双色纳米荧光探针,并对合成的双色纳米探针进行了表征与鉴定。本论文主要分为四个部分,内容如下:第一章主要涵盖了乳腺癌及循环肿瘤细胞的概述、循环肿瘤细胞体外捕获和在体捕获的研究进展、雌激素受体的概述、纳米金及纳米金探针在检测方法中的应用等内容。在第二章建立了一种基于留置针输液过程的CTCs在体捕获方法。可成功捕获注射到野生鼠、兔子及裸鼠静脉中的DAPI标记MCF-7细胞。注射到裸鼠静脉5个细胞时,可成功捕获2个,由裸鼠血液总量计算得出最低捕获及检出限为1个细胞/mL血液。此方法有效避免了CTCs分布不均匀造成的体外捕获检测方法的取样误差,提高了分析的准确度和灵敏度。此捕获操作是伴随输液过程同时进行的,不会引起额外的身体损伤,容易被患者接受。这种简单、快速、损伤小的在体捕获方法可随着留置针的广泛应用而普及。第三章设计并合成了用于雌激素受体检测的双色纳米荧光探针。带有荧光染料标记的DNA双链与纳米金进行组装,组装完成后,DNA链上的荧光会被纳米金猝灭。双色纳米荧光探针通过碱基互补配对与目的基因相结合,将荧光链竞争下来,荧光恢复。第四章对本文建立的CTCs捕获方法和双色纳米荧光探针的设计与合成进行了总结。利用留置针可以有效捕获体内的CTCs,且操作简单、方便快捷、损伤较小。双色纳米荧光探针灵敏度高,有良好的核酸酶稳定性和生物亲和力,具有较大的应用前景。
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