【摘 要】
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目的探讨小檗胺对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞增殖的抑制作用及机制,为其临床治疗骨肉瘤的应用提供一定的实验依据。方法1.UMR-106细胞培养于含10%胎牛血清、青霉素100U/mL及链霉
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目的探讨小檗胺对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞增殖的抑制作用及机制,为其临床治疗骨肉瘤的应用提供一定的实验依据。方法1.UMR-106细胞培养于含10%胎牛血清、青霉素100U/mL及链霉素100mg/L的RPMI-1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养。2.用不同浓度的小檗胺(0、2、4、8、16、32mg/L)分别处理UMR-106细胞,作用时间分别为24,48,72h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测小檗胺对UMR-106细胞增殖的抑制作用。3.用不同浓度的小檗胺(0、4、8、16mg/L)分别处理UMR-106细胞24h,Hoechst33258染色激光共聚焦扫描显微镜观察细胞的形态学变化。4.用不同浓度的小檗胺(0、4、8、16mg/L)分别处理UMR-106细胞24h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率(Annexin V/PI染色)5.用不同浓度的小檗胺(0、4、8、16mg/L)分别处理UMR-106细胞24h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化(PI染色)6.用不同浓度的小檗胺(0、4、8、16mg/L)分别处理UMR-106细胞24h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内Bcl-2、Bax水平,7.用不同浓度的小檗胺(0、4、8、16mg/L)分别处理UMR-106细胞24h后,采用分光光度法检测Caspase-3的活性。8.采用SPSS17.0统计学软件进行数据处理,实验数据以x±s表示。多组间数据比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,P<0.05时认为有显著性差异。结果1.小檗胺以剂量依赖方式显著抑制UMR-106细胞的增殖(P<0.01),其作用24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为24.69、8.03和3.54mg/L。2.小檗胺处理组可见核固缩和凋亡小体。3.小檗胺处理组细胞(0、4、8、16mg/L)早期凋亡率分别为(1.64±0.29)%、(3.58±0.31)%、(6.27±0.47)%和(11.27±1.09)%,与0mg/L小檗胺组比较,差异有统计学意义(P<0.01)4.与0mg/L小檗胺组比较,G0/G1期细胞比例增高,而S期和G2/M期细胞比例降低(P<0.01)。5.小檗胺剂量依赖性地降低Bcl-2,增高Bax,降低Bcl-2/Bax比值,并增强Caspase-3的活性。结论小檗胺体外通过诱导细胞凋亡和G0/G1期阻滞抑制骨肉瘤UMR-106细胞增殖,其诱导凋亡的机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,增强Caspase-3的活性有关。
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