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以蔗糖密度梯度离心法提纯的PRRSV-SC1株作为抗原,免疫家兔制备兔抗PRRSV的IgG,成功建立了检测猪繁殖与呼吸道综合症病毒抗原的间接免疫酶组织化学法。经交叉试验、吸收试验、替代试验和阳性、阴性对照试验表明该法具有敏感性高,特异性好的优点。该方法工作的最佳条件为:用4%的中性多聚甲醛液固定组织,以APES(3-Amino Propyltriethoxy Silane)为粘片剂,石蜡切片在37℃下处理过夜后进行间接法染色,一抗稀释度为1:20,酶标二抗(HRP)的工作浓度为1:30,微波修复抗原10min,3%的过氧化氢甲醇溶液处理样品20min,一抗培育时间为4℃下过夜,封闭血清培育时间为37℃下30min,酶标二抗培育时间为37℃下30min,DAB(3,3’-diamino-benzidine tetrahydrochloride;3,3’-二氨基联苯胺四盐酸盐)5min显色,可获得较满意的染色效果。 该方法只与PRRSV感染猪组织呈现阳性反应,与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪乙脑病毒人工感染并致死仔猪的肝脏组织呈现阴性反应。PRRSV SC-1株人工感染28日龄仔猪后第5天起有个别猪开始出现打喷嚏,眼睑水肿以及腹泻,被感染猪群的体温变化并不明显。剖检病变从14天起以淋巴结出血为主,特别是颌下淋巴结、肩前淋巴结、肺门淋巴结、髂下淋巴结、腹股沟淋巴结等出血较严重。初期可见感染的肺组织肺泡壁毛细血管充血,血管内皮肿胀,肺泡腔细胞成分增多,随后可见感染后肺组织发生弥浸性间质性肺炎。用该方法检测人工感染仔猪,在增宽的肺泡隔中散在的数量不等的巨噬细胞胞浆检测到阳性,其中的毛细血管以及与支气管和细支气管并行的小脉管内皮细胞胞浆也检测到少量的抗原,在支气管粘膜下以及细支气管周围浸润的细胞中散在的巨噬细胞胞浆也检测到了抗原;脾脏的阳性主要分布于滤泡的生发中心以及其周围的边缘区和脾窦周围:扁桃体的隐窝及其周边检测到阳性;在胸腺小体,胸腺的皮质和髓质都散在阳性信号:淋巴结的阳性主要分布在髓索内、皮髓质窦周围,有时也出现在窦内、淋巴小结周围的疏松结缔组织内:肠绒毛粘膜上皮细胞,淋巴集结的淋巴小结生发中心也检测到了阳性。肝脏肿大的库氏细胞和汇管区浸润的少量巨噬细胞中检测到了阳性。 该法具有特异、直观和敏感的特点,可用于PRRSV感染的实验室诊断、抗原定位及甲醛固定样本的回顾性诊断。