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第一部分邻苯二甲酸二丁酯对孕鼠及其子代体内睾酮、雌激素及孕酮水平的影响目的:胚胎外生殖器的发育有赖于性激素的诱导作用。邻苯二甲酸二丁酯作为一种常见的环境内分泌干扰物(Environmental Endocrine Disruptors,EED),对胚胎外生殖器的发生发育有着重要的影响。此部分探讨了邻苯二甲酸二丁酯(Di-butyl Phthalate,DBP)暴露对妊娠期SD大鼠及其子代体内性激素水平的影响。方法:将妊娠期的孕鼠随机分为三组:(1)800mg/kg玉米油灌胃组(对照组),(2)400mg/kg DBP灌胃组,(3)800mg/kg DBP灌胃组。分别于孕鼠孕13-18天期间进行强饲灌胃并收集孕鼠血样,采用ELISA的方法进行性激素含量的检测。在孕19天时剖腹取出胎鼠,留取雌性胎鼠生殖结节、雄性胎鼠生殖结节及睾丸观察其形态并进行HE切片染色;收集孕鼠及胎鼠血样,采用ELISA的方法进行性激素的检测。结果:1.800mg/kg剂量的DBP会导致胎鼠尿道下裂,表现为生殖结节腹侧包皮缺如,尿道板未完全融合,开口位于腹侧裂隙样畸形,发生率为35.1%。2.在孕13-18天,三组孕鼠体内睾酮和雌激素水平均出现持续的上升,在孕19天时睾酮和雌激素水平出现突然的下降。3.与对照组孕鼠相比,DBP灌胃组孕鼠血清睾酮及雌激素含量有所增加,尤其以低剂量DBP灌胃组为著。DBP灌胃组孕鼠孕酮水平持续较低,且随妊娠天数上升的趋势不明显。4.相比于对照组,DBP暴露的孕鼠,在妊娠后期,其体内的睾酮水平相对较高,孕酮水平相对较低,而其雄性后代中的睾酮水平却出现明显的下降,孕酮水平出现明显的上升。结论:800mg/kg DBP可以诱导雄性仔鼠产生尿道下裂。DBP暴露会导致孕鼠血清睾酮和雌激素水平上升,孕酮水平下降,并引起母体内性激素水平与胎鼠的性激素水平产生相反的差异,而且这种差异在低剂量的时候反而更加明显。第二部分邻苯二甲酸二丁酯对仔鼠生殖器官中PR、ATF4、p-eIF2α表达的影响目的:妊娠期摄入孕酮会增加雄性子代患尿道下裂的风险,这说明孕酮对雄性子代外生殖器的发生起重要作用,而这些作用可能是通过与孕酮受体(PR)之间的相互作用来调节的。另外,细胞的凋亡和自噬可能也参与了尿道下裂的发生。此部分探讨了邻苯二甲酸二丁酯对仔鼠生殖器官中PR、ATF4、p-eIF2 α表达的影响。方法:将妊娠期的孕鼠随机分为三组:(1)800mg/kg玉米油灌胃组(对照组),(2)400mg/kg DBP灌胃组,(3)800mg/kg DBP灌胃组。留取其子代的生殖结节及睾丸组织,采用免疫组化实验观察孕酮受体在子代外生殖系统中的分布,采用PCR、Western bolt实验观察PR、ATF4、p-eIF2 α在基因水平及分子水平表达差异。结果:1.免疫组化中观察到,孕酮受体在胎鼠生殖结节中主要分布在尿道板以及腺体细胞中。2.与玉米油组相比,DBP灌胃组雌、雄性仔鼠生殖结节以及雄性睾酮中孕酮受体(PR)的基因水平、蛋白水平以及免疫组化平均光密度(AO)值均增加,且均以400mg/kg DBP灌胃组为著,其差异存在明显的统计学意义(P<0.05)。3.细胞的凋亡和自噬相关因子ATF4、p-eIF2 α随着DBP灌胃剂量的增加,其蛋白水平的表达均呈逐渐增加趋势。结论:孕酮受体在生殖结节的发生发育,尤其是尿道板的发育中具有一定的作用。低剂量的DBP会刺激生殖系统中孕酮受体的显著增生。DBP暴露组中ATF4及p-eIF2α蛋白含量的增加证明了细胞凋亡和自噬很可能参与雄性胎鼠尿道下裂的发生。