【摘 要】
：
目的:马链球菌马亚种（Streptococcus equi subsp.equi,S.equi）是引起马属动物马腺疫的病原菌,虽然大多数马可以从疾病中恢复,但是,一些康复的马仍然携带S.equi,导致幼马感染,这成为马腺疫在全球范围内持续存在的主要因素。为防止感染,疫苗接种成为控制这种疾病传播的有效途径。我国尚无S.equi相关的疫苗产品,故本试验拟通过临床分离株S.equi XJ201902制作
论文部分内容阅读
目的:马链球菌马亚种（Streptococcus equi subsp.equi,S.equi）是引起马属动物马腺疫的病原菌,虽然大多数马可以从疾病中恢复,但是,一些康复的马仍然携带S.equi,导致幼马感染,这成为马腺疫在全球范围内持续存在的主要因素。为防止感染,疫苗接种成为控制这种疾病传播的有效途径。我国尚无S.equi相关的疫苗产品,故本试验拟通过临床分离株S.equi XJ201902制作S.equi灭活疫苗及S.equi SE071780-01939重组蛋白疫苗,通过小鼠试验评价免疫效果,为马腺疫防控提供科学依据。方法:（1）将XJ201902大量扩培后离心收集菌体,筛选最佳甲醛灭活浓度及时间;分别加入弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂,制备XJ201902弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂灭活苗,经性状检验、无菌检验和安全性检验判定合格的疫苗,经腹腔和肌肉途径免疫小鼠,利用间接ELISA方法检测血清中Ig G抗体水平及腹腔注射XJ201902测定免疫保护率。（2）利用PCR技术扩增se071780-01939基因,克隆测序,进行生物信息学分析,并构建表达质粒,经SDS-PAGE电泳及Western Blot鉴定,采用镍柱亲和层析法纯化蛋白,测定蛋白浓度。（3）将灭活的XJ201902、SE071780-01939重组蛋白分别与弗氏佐剂乳化,经肌肉途径免疫小鼠,利用间接ELISA方法检测血清中Ig G抗体水平以及IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ等细胞因子含量,腹腔注射XJ201902测定免疫保护率、组织载菌量和组织病理学观察,综合评价XJ201902灭活苗、SE071780-01939重组蛋白苗对小鼠的免疫效果。结果:（1）S.equi XJ201902菌液经0.2%甲醛37℃下8h完全灭活,以1:1比例加入弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂制备的S.equi XJ201902弗氏佐剂疫苗和S.equi XJ201902氢氧化铝佐剂疫苗,经性状检验、无菌检验和安全性检验后,判定灭活疫苗合格。小鼠免疫接种试验发现,两种佐剂灭活苗一免14d和二免7d后小鼠血清中的特异性抗体IgG水平均升高,但二免7d后,腹腔注射氢氧化铝佐剂疫苗和弗氏佐剂疫苗抗体效价分别为1:3200和1:6400均低于肌肉免疫接种组1:12800的抗体效价。致死剂量攻毒后,腹腔注射氢氧化铝佐剂疫苗和弗氏佐剂疫苗的保护率分别为50%和75%,均低于肌肉接种组100%的保护率,但氢氧化铝佐剂灭活苗肌肉注射部位出现较为严重的局部反应。（2）成功克隆se071780-01939基因,大小约为939 bp,经预测该基因属于Tro A-like超家族的保守基因,该蛋白属于亲水性蛋白,无跨膜螺旋,不存在跨膜结构,也无信号肽,属于非分泌蛋白。构建了S.equi se071780-01939基因的原核表达重组体p ET32a-01939,Western Blot结果显示,重组表达蛋白具有很好的反应原性,镍柱纯化后蛋白浓度为800μg/m L。（3）将XJ 201902弗氏佐剂灭活苗和SE071780-01939重组蛋白弗氏佐剂苗,经肌肉免疫小鼠,发现XJ 201902弗氏佐剂灭活苗的免疫效果和保护作用强于SE071780-01939重组蛋白苗。灭活苗组最高抗体效价高达1:25600,显著高于SE071780-01939重组蛋白免疫组（1:12800）。两组细胞因子水平IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ均显著高于空白对照组（P＜0.05）。攻毒试验结果显示,灭活苗组和重组蛋白苗组小鼠在肝脏、脾脏和肺脏的细菌载菌量均显著降低（P＜0.05）;与空白对照组和佐剂对照组相比,灭活苗组和重组蛋白苗组的各组织脏器病变均相对减轻。攻毒后10d内,佐剂对照组和空白对照组小鼠全部死亡,重组蛋白苗组保护率为50%;灭活苗组保护率为87.5%。结论:（1）成功制备S.equi XJ201902弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂灭活苗。灭活苗经肌肉注射免疫效果优于腹腔注射,弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂灭活苗对小鼠的免疫效果相当,但氢氧化铝佐剂灭活苗免疫接种部位出现严重的局部反应。（2）成功制备了重组蛋白SE071780-01939弗氏佐剂苗,该疫苗具有一定的免疫效果,但保护率不及XJ201902弗氏佐剂灭活苗。
其他文献
作为我国五大牧区之一的新疆,占全国面积的六分之一,牛羊产业家喻户晓,养猪产业具有发展前景。猪传染病影响着养猪业的发展,其中猪繁殖与呼吸综合征作为影响猪呼吸道问题的重要疾病应当引起养殖户的重视。目的:对新疆部分地区规模化养猪场进行猪繁殖与呼吸综合征的血清学调查与病毒分子生物学检测,了解新疆部分地区猪场PRRS疾病流行情况。根据PRRSV核酸检测阳性结果选取不同地区代表构建PRRSV GP5基因进化树
科学课堂是培养学生科学素养的主要渠道,教科书是师生教学中使用的主要材料,教科书的质量将很大程度影响学生的学习效果和教学者的教学效果。为进一步探索真正适合小学生们的科学教科书,通过选取中国、美国具有代表性的教科书,采用文献分析法、比较分析法和内容分析法,从中美课程标准要求、教科书内容编排、教科书课程难度以及教科书内容呈现方式方面,进行中美科学教科书3-4年级“物质科学”领域部分内容的比较研究。研究发
目的:羊传染性脓疱病毒主要侵害绵羊、山羊,具有接触传染性、嗜上皮性。患病羔羊口唇部位的皮肤和黏膜会形成丘疹、水疱、脓疱、溃疡和厚痂,因有开放性伤口,患病动物极易继发感染,对我国养羊业造成了巨大的危害。疫苗接种是预防和控制该病流行的最主要的方式,但市场上并无用于预防羊传染性脓疱的商品化疫苗。本试验旨在利用羔羊睾丸细胞制备羊传染性脓疱灭活疫苗并对孕羊和羔羊免疫接种后观察统计羔羊发病情况来对其免疫效果进
采用整群抽样法,对黑龙江省牡丹江市两所中学和河南省洛阳市某中学共发放674份调查问卷,探讨家庭社会阶层与初中生自尊的关系、儿童期忽视和友谊质量在二者关系中的作用机制、四个变量在人口学变量上的差异。结果表明:（1）初中生主客观家庭社会阶层整体均处于中等偏下水平,初中生自尊整体处于中等偏高的水平,初中生儿童期忽视整体处于较低水平,初中生友谊质量整体处于中等偏高的水平。各变量在部分人口学变量上存在显著性
目的:目前羊产业饲养方式由散养转变为集约化舍饲,多胎和常年发情的湖羊则成为我国优秀的舍饲绵羊品种。为了让湖羊生产体系达到两年三产,则需在产后尽快进入下一个繁殖周期,这对湖羊子宫复旧的时间也有了一定的要求。因此,母羊产后尽快完成子宫复旧对恢复其生殖性能、缩短产羔间隔和提高繁殖力都具有非常重要的生产实践意义。本研究首先通过直肠B超对湖羊进行早期妊娠诊断,针对不同产羔数、氯前列烯醇和缩宫素等因素对初产湖
目的:球虫病是目前危害养禽业最严重的疾病之一,严重限制养禽业的发展,球虫病的控制主要基于饲料中添加抗球虫化学类药物和抗生素,但抗药性和动物产品药物残留的问题导致学者寻找新的有效和更安全的替代品。中药治疗虫积在我国有悠久的历史且中药资源丰富,对中草药的开发一直是国内研究热点。本课题以新疆黄羽肉鸡为研究对象,旨在探究抗球虫中药作用对柔嫩艾美耳球虫E.tenella致肉鸡血便后肠神经胶质细胞（EGCs）
单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）是一种重要的食源性病原体,死亡率高达20-30%。目前,高毒力ST87型LM菌株已在食品和临床病例中出现。毒力岛4（LIPI-4）是新近发现的具有中枢神经系统（CNS）及胎盘嗜性的毒力因子。前期从冷冻鸡肉中分离获得ST87型携带LIPI-4的LM分离株,分离株可能来源于加工环境也可能来源于鸡本身的感染,如果来源于鸡本身,那么
汉字作为信息传递的载体,对人们日常交流和学习有着不可估量的作用。汉字书写练习不仅有助于个体增强意志力、提升忍耐力,还有利于稳定情绪,提高个人修养。汉字书写效能感是影响初中生汉字书写水平的重要因素,对初中生综合素质的培养有着至关重要的作用。为调查初中生汉字书写效能感现状,依据自我效能感理论和初中生访谈结果编制了初中生汉字书写效能感问卷并检验其信效度。采用文献查阅、专家访谈和理论筛选等方法编制问卷,对
初中生随着学业任务的增多,其对压力的感知也随之增加,压力知觉水平的增高会引发学生的抑郁、焦虑、烦躁等负性情绪,影响其身心健康发展。为了解初中生压力知觉现状,明确被动性社交网站使用对初中生压力知觉的作用机制,研究构建了一个有调节的中介模型,重点考察了上行社会比较在二者关系中的中介作用及希望的调节作用。研究从被动性社交网站使用这一视角出发,结合上行社会比较、希望,探究被动性社交网站使用对压力知觉的作用
多胎萨福克羊表现出肉用性能良好、多胎等优良生产性能,这使得其具有很大的推广价值,而推广过程中绵羊由于饲养环境等因素的改变会对适应性指标产生影响甚至发生基因突变。因此,开展育成的新品种（系）在不同地域适应性研究具有重要意义。目的:本研究旨在探讨不同地域繁育的多胎萨福克羊外周血中生理、生化、免疫因子等指标的差异,为研究绵羊的适应性遗传演化,以及开展多胎萨福克羊新品系的选育和推广提供基础。方法:以在新疆