不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株体外致龋性研究

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xuzw93
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目的:探讨不同龋敏感儿童口腔变形链球菌临床分离株的产酸、耐酸及合成细胞外多糖能力的差异,分析其毒力因子在致龋过程中所起的作用,从而为完善乳牙龋危险性预测方法及乳牙龋的预防提供有力的理论和实验依据。 方法: 1.以高龋,龋失补指数(decayed,missing,filledteeth index,dmft)≥6、中龋,6>dmft≥4,无龋,dmft=0儿童口腔中分离得到的不同基因型的变形链球菌111株(其中高龋组44株,中龋组36株,无龋组31株)为实验菌株,以国际标准菌株变形链球菌(S.mutans)ATCC 25175(血清型C)为阳性对照,于轻唾琼脂(MS)平板复苏,取典型菌落接种于牛心脑浸液(Brain Heart Infusion,BHI)中增菌24 h,涂片检查为纯培养后,配制相同浓度的菌悬液(A 540nm=1.0),加入含5%蔗糖,不同pH值(以0.5为间隔,pH4.0-7.0)的BHI液体培养基中厌氧(80%N2、10%H2、10%CO2)培养48h后,采用精密酸度计pHS-3C,测定培养物上清液的终末pH值,比较细菌的产酸能力(△pH);将相同菌液浓度的变形链球菌临床分离株菌悬液和标准株菌悬液分别在不同pH(以0.5为间隔,pH 4.0~7.0)的BHI液体培养基中培养48h后,用紫外分光光度计在540nm处测定吸光度,比较细菌的生长情况。 2.取相同浓度的各变形链球菌临床分离株菌悬液和标准株的菌悬液,按菌液与含1%蔗糖的BHI液体培养基1:10(v、v)比例接种细菌,37℃厌氧培养24h,离心,收集上清液,细菌沉淀物用5ml蒸馏水洗涤、离心两次,三次上清液合并;水沈后的细菌加入0.5mol/L NaOH5ml洗涤、离心三次,合并上清液。两部分上清液各取2ml,分别加入三倍体积无水乙醇,4℃冰箱放置过夜,离心,弃水相,沉淀分别加入5ml蒸馏水及5ml 0.1 mol/LNaOH溶液溶解,用葸酮法分别测定水溶性及水不溶性葡聚糖含量。 结果: 1.儿童高、中龋组患者口腔中分离出的变形链球菌临床分离株产酸和耐酸能力明显高于无龋组患者,差异具有统计学意义(p<0.05),但与国际标准菌株比较,无显著性差异(p>0.05)。在同一个体所带不同基因型变形链球菌菌株的产酸能力和耐酸能力有差异,高龋组存在部分菌株产酸耐酸能力明显高于其他菌株。 2.不论是产水溶性葡聚糖还是水不溶性葡聚糖能力,高、中龋组和标准株无明显不同,但是均强于无龋组(p<0.05);同一个体所分离的不同基因型变形链球菌菌株合成胞外多糖的能力有差异,存在部分菌株合成胞外多糖的能力强于其他菌株;高、中龋组和无龋组产水溶性葡聚糖多于水不溶性葡聚糖。 结论: 1.高龋,中龋儿童携带的变形链球菌的产酸能力、耐酸性和合成胞外多糖能力显著高于无龋儿童。无龋儿童定植的变形链球菌菌株的致龋毒力多较弱或仅有单项致龋力较强。 2、不同基因型菌株致龋能力是不同的,高龋儿童变形链球菌的高致龋性与其携带有产酸、耐酸和合成胞外多糖能力均强的高致龋毒力菌株有关。
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