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目的分别建立人类博卡病毒(Human Bocavirus, HBoV)、人类冠状病毒229E(Human Coronavirus 229E, HCoV-229E)的实时荧光定量PCR(real-time Fluorescent Quantitative PCR, FQ-PCR)检测方法,检测呼吸道感染患儿标本的HBoV、HCoV-229E,并探索其临床意义。方法分别根据HBoV NP1基因、HCoV-229E M基因的保守序列设计引物和Taqman探针,扩增NP1基因、M基因片段,并将其克隆到pGEMT-Easy载体上,构建质粒标准品;建立FQ-PCR检测方法,建立标准曲线,进行敏感性、特异性、重复性试验;检测收集到的195例临床标本中HBoV、HCoV-229E的感染情况,同时用普通PCR检测这195例临床标本中的HBoV、HCoV-229E;将FQ-PCR结果与普通PCR结果进行比较分析。结果1. FQ-PCR系统用于检测HBoV NP1基因,灵敏度为101copies/μl;对临床其他常见呼吸道病毒不出现特异性扩增曲线;批内变异系数为0.13%,批间变异系数为0.14%。2.用FQ-PCR检测195例临床标本,共检出HBoV阳性12例(6.2%)。普通PCR检测结果与FQ-PCR检测结果一致。3. 12例HBoV阳性标本中,患儿的年龄均为4岁以下,急性下呼吸道感染组阳性率为15.6%(10/64),显著高于急性上呼吸道感染组的1.5%(2/131)(X2=12.45,P<0.005)。4. FQ-PCR系统用于检测HCoV-229E M基因,灵敏度为101copies/μl;对临床其他常见呼吸道病毒不出现特异性扩增曲线;批内变异系数为0.4%,批间变异系数为0.7%。5.用FQ-PCR检测195例临床标本,HCoV-229E阳性2例(1.0%)。普通PCR检测结果与FQ-PCR检测结果一致。6.两例HCoV-229E阳性标本均为急性下呼吸道感染的患儿。结论1.本研究建立的HBoV、HCoV-229E的FQ-PCR检测方法灵敏度、特异性、重复性均较好,可用于临床呼吸道标本的检测以及HBoV与HCoV-229E的流行病学监测。2.福州地区冬春季急性下呼吸道感染患儿中,存在HBoV、HCoV-229E感染。HBoV主要引起4岁以下婴幼儿的急性下呼吸道感染。