目的本文通过描述和分析甲型H1N1流感大流行后山东省甲型H1N1的流行病学特征,分析重症死亡病例的危险因素,分析大流行后期甲型H1N1流感病毒HA和NA基因特征,构建基因进化树,探讨其遗传变异规律,为预测流感发展趋势提供基础理论依据,为今后流感监测及防控提供科学依据。方法1.利用中国流感监测信息系统和传染病报告信息系统,下载山东省流感监测数据。抽取甲型H1N1流感病例相关信息,对甲型H1N1流感病例的时间分布、年龄分布、地区分布进行描述流行病学研究,并与2009年的大流行期间的流行特征进行比较;抽取报告系统中甲型H1N1流感死亡病例的相关信息及相关临床信息,分析其危险因素。2.选取2014-2018监测年度分离的甲型H1N1流感毒株,提取病毒RNA,利用Primer5.0软件设计的甲型H1N1流感病毒HA、NA上、下游引物对甲型H1N1流感病毒的HA和NA基因进行RT-PCR扩增,产物送至相关公司进行测序;用Edit Seq软件对测得的基因序列进行序列拼接,通过MEGA5.05软件对流感病毒基因核苷酸序列进行Blast比对和同源性分析,构建基因进化树,计算与疫苗株的同源距离;利用翻译的氨基酸序列,与疫苗株进行比较找出相应的变异位点,并查找是否处于抗原决定簇上或是否为关键的标志性基因簇。结果1.2014-2018监测年度毒株分布结果及重症病例死亡危险因素2014-2018监测年度山东省国家流感网络实验室共检测出8004株流感病毒株（阳性分离率13.37%）,标本数从10月份开始明显上升,一直维持至次年3月份,甲型H1N1流感病毒、季节性H3N2流感病毒及B型流感病毒交替流行。阳性病例主要集中在5-14岁年龄段,占比16.68%;毒株阳性分离率居前3位的为威海、菏泽、德州。本次共收集重症病例63例,其中男性40人（63.49%）,女性23人（36.51%）,单因素分析结果显示,性别、年龄、呼吸过速、血小板、呼吸衰竭、感染中毒性休克及多功能脏器不全等因素对甲型H1N1流感重症死亡有影响,多因素logistic回归分析血小板含量异常和呼吸衰竭是甲型H1N1流感重症病例死亡的危险因素。2.2014-2018监测年度甲型H1N1流感毒株的HA、NA基因特征山东省所分离到的甲型H1N1流感病毒的HA和NA基因序列的同源性分析结果分别为94.3～99.9%和97.8～99.6%。HA基因系统发生树分析显示,山东省分离的2015-2016监测年度H1N1流感病毒的HA基因聚集成一簇,与A/California/07/2009（H1N1）的亲缘关系较近;山东省2016-2018监测年度98.1%的H1N1流感病毒的HA基因聚集成一簇,与A/Michigan/45/2015（H1N1）的亲缘关系较近。NA基因系统发生树分析显示,山东省分离的2015-2016监测年度87.0%的甲型H1N1流感病毒NA基因聚集成一簇,与A/California/07/2009（H1N1）的遗传距离最短;2016-2018监测年度甲型H1N1流感病毒NA基因分布在一个大分支,与A/Michigan/45/2015（H1N1）的遗传距离最短,与A/California/07/2009（H1N1）的遗传距离较远。进化树显示2014-2018监测年度的128株甲型H1N1流感毒株存在明显的时间特征,但没有明显的地域特征。与疫苗株相比,2014-2018监测年度的绝大多数甲型H1N1流感毒株有18个氨基酸位点发生变异,变异率3.17%,其中有4处氨基酸变异位于抗原决定簇,裂解位点序列未发生变异,新增糖基化位点NQS/T162-164。NA蛋白有18个氨基酸位点发生明显变异,变异率为3.83%,丢失糖基化位点NFS386-388,未发现耐药位点H275Y突变。结论1.2014年4月至2018年3月山东省流感病毒的流行高峰在10月-次年3月,甲型H1N1流感病毒、季节性H3N2流感病毒及B型流感病毒交替流行。2.血小板下降、呼吸衰竭是流感重症病例死亡的危险因素。3.2014年4月至2018年3月山东省分离的H1N1流感流行株的HA、NA基因的同源性较高;HA、NA蛋白均发生了氨基酸变异,HA蛋白部分氨基酸替换发生在抗原决定簇区,HA基因普遍可能发生了抗原性漂移。WHO推荐的疫苗株A/California/07/2009（H1N1）对2015-2016监测年度的H1N1流感毒株有一定的保护效果,而A/Michigan/45/2015（H1N1）对2016-2018监测年度的H1N1流感毒株有一定的保护效果。4.2014年4月至2018年3月分离的甲型H1N1流感毒株HA蛋白新增一糖基化位点以及NA蛋白丢失一糖基化位点,可能会都对HA、NA基因的功能产生影响。