【摘 要】
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莱茵衣藻是一种单细胞藻类生物,具有繁殖快,培养方式简单,纤毛和细胞体容易分离等特点,是研究纤毛组装和纤毛病的理想模式生物。纤毛组装和维持所需要的前体蛋白是依赖一种称为纤毛内运输机制IFT（intraflagellar transport,IFT）的方式输入和输出纤毛。纤毛作为特异化的细胞天线,在细胞内信号传导中发挥重要的作用。许多信号分子,如G蛋白偶联受体（GPCR）、离子通道和其它类型的信号蛋白
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莱茵衣藻是一种单细胞藻类生物,具有繁殖快,培养方式简单,纤毛和细胞体容易分离等特点,是研究纤毛组装和纤毛病的理想模式生物。纤毛组装和维持所需要的前体蛋白是依赖一种称为纤毛内运输机制IFT（intraflagellar transport,IFT）的方式输入和输出纤毛。纤毛作为特异化的细胞天线,在细胞内信号传导中发挥重要的作用。许多信号分子,如G蛋白偶联受体（GPCR）、离子通道和其它类型的信号蛋白,均定位于纤毛,这些是纤毛作为信号天线的分子基础。因此,纤毛组装缺陷或者功能缺失将导致信号蛋白定位异常,最终导致一系列先天性疾病,如BardetBiedl综合症（BBS）,Joubert综合症和Meckel综合症等,这些与纤毛相关的疾病统称为纤毛病,其临床症状包括肥胖症、糖尿病、多指症、智力迟缓等。IFT主要是由IFT复合物和马达蛋白组成。IFT复合物是由IFT-A和IFT-B两个亚蛋白复合物组成,其中IFT-B可进一步分为IFT-B1和IFT-B2两个蛋白复合物。IFT是一种双向运输系统,其中IFT-B和马达蛋白Kinesin-II调控纤毛蛋白从基部到顶部的正向运输,而IFT-A和马达蛋白dynein调控纤毛蛋白从纤毛顶部到基部的反向运输。IFT20是IFT-B2蛋白复合物亚基,但是其作为一个纤毛蛋白在纤毛内的详细功能仍待研究。因此,本研究旨在开发一种高特异性的莱茵衣藻IFT20多克隆抗体,为后续其在纤毛内功能研究奠定基础。为此,首先在大肠杆菌中表达N-端6×His标签标记的IFT20融合蛋白（6×His::IFT20）并对此蛋白进行镍柱亲和纯化,然后将纯化所得6×His::IFT20蛋白作为抗原对新西兰大白兔进行免疫。收集3次免疫抗血清,利用间接ELISA法测定抗血清效价为1:102400。尔后利用protein A纯化珠对所得抗血清进行了Ig G亚型抗体富集,接着利用大肠杆菌表达纯化所得N-端MBP标签标记的IFT20（MBP::IFT20）对Ig G抗血清进行抗原抗体亲和纯化。最后,利用纯化所得的IFT20抗体对CC-125藻种全细胞蛋白提取物进行蛋白免疫印迹鉴定,可知纯化所得IFT20多克隆抗体特异性较高,适用于后续莱茵衣藻IFT20纤毛内功能研究。
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