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【目的】
研究miR-3162-3p对过敏原OVA干预的HBE细胞自噬表达的影响并初步探讨其中的分子机制。
【方法】
1.将HBE细胞分成对照组和OVA干预组(包括50、100、150、200、250μM亚组)，对照组采用PBS代替OVA。PCR技术检测各组内源性miR-3162-3p的表达水平，Westernblot(WB)技术检测各组β-catenin及自噬相关蛋白LC3等的表达水平。
2.将HBE细胞分成对照组、NC组、Mimic组、Anti组。Mimic组即mimic-miR-3162-3p浓度为50nM，Anti组即anti-miR-3162-3p浓度为100nM，分别转染HBE细胞6h后，WB技术检测各组LC3蛋白表达水平变化。
3.将HBE细胞分成对照组、OVA组、Anti组、OVA+Anti组。OVA组即OVA浓度为250μM，Anti组即anti-miR-3162-3p浓度为100nM，OVA+Anti组即100nManti-miR-3162-3p转染HBE细胞6h后，给予250μMOVA继续干预24h。WB技术检测各组LC3、Beclin-1蛋白表达水平变化。
4.将HBE细胞分成对照组、OVA干预组，对照组即仅含未处理的HBE细胞悬液，OVA干预组包括200μM、400μM、800μM、1mM、2mM、4mM组，空白组及对照组采用PBS代替OVA，MTT技术检测各组细胞存活率。
5.将HBE细胞分成阴性对照组、实验组，阴性对照组包括OVA+mimicNC组、OVA+AntiNC组，实验组包括OVA+mimic-miR-3162-3p组、OVA+anti-miR-3162-3p组，利用MTT技术检测各组细胞存活率。
6.通过转染过表达质粒pIRES2-EGFP-β-catenin，将HBE、BEAS-2B细胞分成OVA干预组、β-catenin质粒组、OVA+β-catenin组，OVA组即OVA浓度为250μM，β-catenin质粒即转染pIRES2-EGFP-β-catenin质粒质量为12.5μg，OVA+β-catenin组即12.5μgpIRES2-EGFP-β-catenin转染HBE细胞6h后，给予250μMOVA继续干预24h，WB技术检测各组LC3蛋白表达水平变化。
【结果】
1.通过OVA、miR-3162-3p类似物及抑制剂体外干预HBE细胞，利用WB、qRT-PCR技术分析比较，结果发现与对照组相比，OVA干预组miR-3162-3p表达水平上升，OVA干预组及mimic-miR-3162-3p组HBE细胞自噬LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白比例增加，而anti-miR-3162-3p能明显减轻OVA处理后HBE细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白比例。
2.通过OVA、miR-3162-3p类似物及抑制剂体外干预HBE细胞，利用MTT技术分析比较，结果发现与对照组相比，高浓度OVA(2mM以上)可抑制细胞存活；与阴性对照组相比，OVA+mimic-miR-3162-3p组细胞存活率下降，而OVA+anti-miR-3162-3p组细胞存活率升高。
3.通过OVA体外干预HBE细胞，利用WB技术检测，结果发现与对照组相比，OVA浓度在150μM以上，β-catenin蛋白表达明显下降；转染过表达质粒pIRES2-EGFP-β-catenin后，OVA+β-catenin组较OVA组HBE或者BEAS-2B细胞自噬LC3-Ⅱ蛋白表达增加。
【结论】
1.MiR-3162-3p介导OVA诱导HBE细胞的自噬，并影响OVA对HBE细胞的损伤。
2.Anti-miR-3162-3p能降低细胞自噬水平并促进细胞存活。
3.MiR-3162-3p能介导OVA诱导的HBE细胞自噬，但可能不通过靶蛋白β-catenin信号途径。
研究miR-3162-3p对过敏原OVA干预的HBE细胞自噬表达的影响并初步探讨其中的分子机制。
【方法】
1.将HBE细胞分成对照组和OVA干预组(包括50、100、150、200、250μM亚组)，对照组采用PBS代替OVA。PCR技术检测各组内源性miR-3162-3p的表达水平，Westernblot(WB)技术检测各组β-catenin及自噬相关蛋白LC3等的表达水平。
2.将HBE细胞分成对照组、NC组、Mimic组、Anti组。Mimic组即mimic-miR-3162-3p浓度为50nM，Anti组即anti-miR-3162-3p浓度为100nM，分别转染HBE细胞6h后，WB技术检测各组LC3蛋白表达水平变化。
3.将HBE细胞分成对照组、OVA组、Anti组、OVA+Anti组。OVA组即OVA浓度为250μM，Anti组即anti-miR-3162-3p浓度为100nM，OVA+Anti组即100nManti-miR-3162-3p转染HBE细胞6h后，给予250μMOVA继续干预24h。WB技术检测各组LC3、Beclin-1蛋白表达水平变化。
4.将HBE细胞分成对照组、OVA干预组，对照组即仅含未处理的HBE细胞悬液，OVA干预组包括200μM、400μM、800μM、1mM、2mM、4mM组，空白组及对照组采用PBS代替OVA，MTT技术检测各组细胞存活率。
5.将HBE细胞分成阴性对照组、实验组，阴性对照组包括OVA+mimicNC组、OVA+AntiNC组，实验组包括OVA+mimic-miR-3162-3p组、OVA+anti-miR-3162-3p组，利用MTT技术检测各组细胞存活率。
6.通过转染过表达质粒pIRES2-EGFP-β-catenin，将HBE、BEAS-2B细胞分成OVA干预组、β-catenin质粒组、OVA+β-catenin组，OVA组即OVA浓度为250μM，β-catenin质粒即转染pIRES2-EGFP-β-catenin质粒质量为12.5μg，OVA+β-catenin组即12.5μgpIRES2-EGFP-β-catenin转染HBE细胞6h后，给予250μMOVA继续干预24h，WB技术检测各组LC3蛋白表达水平变化。
【结果】
1.通过OVA、miR-3162-3p类似物及抑制剂体外干预HBE细胞，利用WB、qRT-PCR技术分析比较，结果发现与对照组相比，OVA干预组miR-3162-3p表达水平上升，OVA干预组及mimic-miR-3162-3p组HBE细胞自噬LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白比例增加，而anti-miR-3162-3p能明显减轻OVA处理后HBE细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白比例。
2.通过OVA、miR-3162-3p类似物及抑制剂体外干预HBE细胞，利用MTT技术分析比较，结果发现与对照组相比，高浓度OVA(2mM以上)可抑制细胞存活；与阴性对照组相比，OVA+mimic-miR-3162-3p组细胞存活率下降，而OVA+anti-miR-3162-3p组细胞存活率升高。
3.通过OVA体外干预HBE细胞，利用WB技术检测，结果发现与对照组相比，OVA浓度在150μM以上，β-catenin蛋白表达明显下降；转染过表达质粒pIRES2-EGFP-β-catenin后，OVA+β-catenin组较OVA组HBE或者BEAS-2B细胞自噬LC3-Ⅱ蛋白表达增加。
【结论】
1.MiR-3162-3p介导OVA诱导HBE细胞的自噬，并影响OVA对HBE细胞的损伤。
2.Anti-miR-3162-3p能降低细胞自噬水平并促进细胞存活。
3.MiR-3162-3p能介导OVA诱导的HBE细胞自噬，但可能不通过靶蛋白β-catenin信号途径。