【摘 要】
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目的:观察2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM）男性患者及经盐酸法舒地尔治疗前后T2DM雄性大鼠的脂联素（Adiponectin,A PN）的变化,探讨APN对T2DM影响男性生殖功能中的调控机制及盐酸法舒地尔对睾丸的作用。方法:1.临床研究部分:选择在河北医科大学第二医院生殖医学科行体外受精-胚胎移植助孕的男性患者40例,根据空腹血糖分为T2DM患者（N=20）
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目的:观察2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM）男性患者及经盐酸法舒地尔治疗前后T2DM雄性大鼠的脂联素（Adiponectin,A PN）的变化,探讨APN对T2DM影响男性生殖功能中的调控机制及盐酸法舒地尔对睾丸的作用。方法:1.临床研究部分:选择在河北医科大学第二医院生殖医学科行体外受精-胚胎移植助孕的男性患者40例,根据空腹血糖分为T2DM患者（N=20）和对照组（N=20）。收集研究对象的一般资料及性激素、精液质量等指标,检测血清及精浆中APN、炎性细胞因子白介素-6（Interleukin-6,I L-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）水平,并对APN、IL-6、TNF-α水平及各临床指标进行比较。2.动物研究部分:选择24只6周龄雄性SD大鼠分为对照组（N=6）、糖尿病造模组。我们对糖尿病造模组大鼠的腹腔注射链脲佐菌素（25mg/Kg）制备2型糖尿病大鼠模型。18只造模成功的大鼠被随机分为3组:T2DM组（N=6）;LF治疗组（N=6）,HF治疗组（N=6）。LF治疗组、HF治疗组分别给予低剂量盐酸法舒地尔注射液（Low Fasudil Hydrochlo ride Injection,LF）10mg/kg,高剂量盐酸法舒地尔注射液（High Fasudi l Hydrochloride Injection,HF）30mg/Kg,四个月后,对实验大鼠实施安乐死,采集大鼠的血标本。取出两侧睾丸组织,对其称重并计算睾丸指数,剥离附睾,制备精子悬液。测精子总数及精子活动率,ELISA法测定血清睾酮、APN水平。HE染色观察睾丸组织。蛋白用免疫印迹（Western Bl ot）和免疫组化（immunohistochemical）法分析睾丸APN、脂联素受体1（Adiponectin Receptor 1,AdipoR1）和脂联素受体2（Adiponectin Rec eptor 2,Adipo R2）蛋白表达水平。相关数据采用单因素方差分析进行组间比较。结果:1.临床研究部分:（1）与对照组比较,T2DM组血清T水平明显降低（P<0.05）;精子活动率、精子总数及PR均明显降低（P<0.05）。（2）与对照组比较,T2DM组血清及精浆脂联素水平均降低,其中血清脂联素水平降低差异有统计学意义（P<0.05）;血清及精浆的IL-6、TNF-α水平升高（P>0.05）。（3）血清中TNF-α与精子浓度、精子总数呈负相关性（P<0.05）。血清中IL-6与精子总数、精子总活率、PR呈负相关性（P<0.05）。2.动物研究部分:（1）与对照组大鼠比较,T2DM组大鼠毛色暗淡,易出现激惹现象,体重降低。肉眼观察T2DM组大鼠睾丸外观较对照组偏小。（2）与对照组比较,T2DM组大鼠体重及精子总数明显降低（P<0.05）。（3）与对照组比较,T2DM组血清睾酮及脂联素水平明显降低,FBG水平明显升高（P<0.05）。与T2DM组比较,HF组血清睾酮水平明显升高（P<0.05）。（4）HE结果显示T2DM组大鼠睾丸的曲细精管萎缩,生精细胞排列疏松。盐酸法舒地尔治疗后较前有所改善。（5）免疫印迹结果显示与对照组比较,T2DM组睾丸组织APN、AdipoR1和Adipo R2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与T2DM组比较,LF组和HF组睾丸组织APN、AdipoR1、Adipo R2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）。（6）免疫组化结果显示APN和Adipo R2免疫反应性主要在间质细胞中。AdipoR1免疫反应性主要在曲细精管内。免疫组化AOD值与正常组相比,T2DM组APN、AdipoR1、Adipo R2水平均降低（P<0.05）。结论:1.T2DM可影响男性生殖功能,主要表现为性激素及精液质量异常。2.T2DM影响男性生殖功能的机制可能与APN表达减少,IL-6、TNF-α炎症因子表达增加造成的组织损伤有关。3.大剂量盐酸法舒地尔可能通过上调APN、AdipoR1及Adipo R2表达水平,减轻糖尿病对睾丸组织损害产生保护性作用。
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