目的:探究芦丁对叔丁基过氧化氢(TBHP)所致的HepG2细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法:采用TBHP诱导HepG2细胞氧化损伤建立损伤模型,将细胞随机分为对照组、TBHP损伤组、芦丁低、中、高剂量组。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测芦丁对HepG2细胞增殖的影响,比色法检测细胞外液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;通过DCFH-DA荧光染色法观察细胞内活性氧(ROS)的水平,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)技术观察TBHP所致HepG2细胞凋亡。Western blot法检测细胞内PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、IKKβ、p53 和 PARP 的蛋白表达情况。结果:经不同浓度的芦丁预处理HepG2细胞24h后,与TBHP损伤组比较,芦丁能显著提高人肝癌HepG2细胞存活率(P<0.05);并且显著降低细胞外液中ALT、AST和LDH活性(P<0.05);降低细胞内MDA含量(P<0.05),升高细胞内SOD活性和GSH含量(P<0.05)。DCFH-DA染色结果表明,与对照组比较,TBHP损伤组细胞产生强绿色荧光,显示细胞内产生过量的ROS(P<0.01);与TBHP损伤组相比较,芦丁低、中、高剂量组细胞分别产生不同程度的微弱绿色荧光,ROS的水平有所降低(P<0.05)。TUNEL染色结果显示,与对照组比较,TBHP损伤组细胞荧光强度明显增高,细胞发生凋亡严重(P<0.01);与TBHP损伤组相比,芦丁低、中、高剂量组细胞荧光强度逐渐减弱,细胞凋亡减少(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,TBHP损伤组HepG2细胞PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达水平下降(P<0.05),而NF-ΚB、p-NF-κB、IKKβ的蛋白表达水平显著上升(P<0.05);与TBHP损伤组相比,芦丁组HepG2细胞内PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达水平显著升高(P<0.05),芦丁高剂量组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达水平最高(P<0.05),而细胞内NF-κB、p-NF-κB、IKKβ的蛋白表达水平下降(P<0.05),芦丁高剂量组NF-κB、p-NF-κB、IKKβ的蛋白表达水平最低(P<0.05)。与对照组相比,TBHP损伤组细胞内p53蛋白表达水平明显升高,而PARP的蛋白表达水平明显下降(P<0.05);而与TBHP损伤组比较,芦丁组细胞p53的蛋白表达水平有所下降,PARP的蛋白表达水平有所上升(P<0.05)。结论:芦丁能够保护叔丁基过氧化氢引起的肝细胞氧化损伤,其保护作用可能与PI3K/Akt和NF-κB信号通路有关。