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在真核细胞中,整个基因组的组蛋白乙酰化水平由组蛋白乙酰化转移酶(HAT)和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)协同调控,从而通过改变染色质的结构进一步影响相应的生物学功能。通常,组蛋白乙酰化转移酶可以使组蛋白的赖氨酸位点发生乙酰化修饰,使染色质结构变得疏松,促进转录因子募集到基因的启动子区域,进而激活基因表达。而组蛋白去乙酰化转移酶则发挥相反的作用。h MOF(human Males Absent On The First)是组蛋白乙酰化转移酶MYST家族成员之一,它作为NSL(Non-Specific Lethal)复合物和MSL(Male Specific Lethal)复合物的共享催化亚基,在细胞内发挥着重要的生物学功能。h MOF在细胞内可以通过乙酰化组蛋白H4K16、以及非组蛋白P53和Nrf2等蛋白因子,参与细胞中基因转录调控、DNA损伤修复、细胞增殖、胚胎干细胞(ESC)自我更新等生物学过程。本文中主要应用了Psingle-t TS-sh RNA可诱导敲低系统,首先成功构建可诱导敲低h MOF的sh RNA质粒,进而为了得到其稳转细胞系,我们经药物G418筛选14天后得到阳性克隆,在非小细胞肺癌细胞A549中成功构建稳转细胞系,当加入少量强力霉素doxycycline诱导该系统启动tet-on反应元件,诱导sh MOF表达并成功敲低h MOF基因。所得到的A549-psingle-t TS-sh MOF稳转细胞系,将为之后系统地研究h MOF的生物学功能提供实验基础。本文通过免疫荧光染色方法,发现如果敲低h MOF可以导致A549细胞形态发生改变,细胞由圆形变成梭形,细胞与周围细胞联系不紧密,细胞迁移率增加,促进细胞发生上皮间充质转化(EMT)现象。随后,我们用Western blot和RT-q PCR方法分别检测EMT相关标志物的蛋白水平和m RNA水平,发现敲低h MOF可抑制E-Cadherin的表达,而且促进E-Cadherin的转录抑制因子Snail的表达。同时,我们在野生型A549细胞中通过瞬转pc3.1-Flag-MOF质粒使细胞过表达h MOF,发现E-Cadherin蛋白表达量上升,Snail转录因子表达量下降。综上所述,我们在本论文中通过一系列实验得出以下结论,在A549细胞中敲低h MOF可以促进细胞迁移,其机制是由于敲低h MOF促进了E-Cadherin的转录抑制因子Snail表达引起的。我们还通过平板克隆实验和CCK8检测,发现敲低MOF还可以抑制细胞增殖。除此之外,在对细胞骨架蛋白进行免疫荧光染色实验时,观察到敲低h MOF后,细胞进入有丝分裂期胞质分裂阶段,正在分裂的两个细胞间的间桥距离比对照组的长,据相关文献报道,这种现象是细胞保护染色质免受损伤的一种方式,该现象的具体机制有待我们以后探究。