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茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核,不同药用部位具有不同的功效作用:茯苓皮为干燥外皮,具有利水消肿的功效;赤茯苓为近外皮部的淡红色部分,具有行水、利湿热、益心润肺的功效;茯苓为削去外皮及切除赤茯苓后的白色部分,具有利水渗湿、健脾宁心的功效;茯神为中间天然抱有松根(即茯神木)的白色部分,具有养心安神、利水消肿、补虚治劳的功效。茯苓三萜类化合物是茯苓中主要有效成分之一,具有抗肿瘤、抗炎、利尿、免疫调节等作用。目前茯苓研究仅限于1种药用部位或2种药用部位,尚未对茯苓4种不同药用部位进行全面比较研究。本研究首次采用液质联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)对茯苓4种不同药用部位茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮进行同时定性鉴别和定量测定,联合主成分分析法(PCA,principal component analysis)和t-检验比较4种不同药用部位间的差异,并建立了赤茯苓质量标准,为科学有效控制茯苓不同药用部位的质量提供参考。第一部分UPLC-QTOF-MS/MS技术同时鉴定、定量及比较茯苓4种不同药用部位中茯苓三萜类化合物目的:建立UPLC-QTOF-MS/MS同时鉴定、定量茯苓三萜类化合物的方法,比较茯苓不同药用部位茯神、茯苓、赤茯苓及茯苓皮的成分差异。方法:电喷雾离子源,将8种茯苓三萜类化合物对照品贮备液针泵到质谱仪,在正负离子模式下,在不同的CE水平上分析[M+H]~+、[M-H]~-离子碎片行为,总结其质谱裂解规律;基于UPLC-QTOF-MS/MS技术,Phenomenex-C18色谱柱(150 mm×2 mm,3μm),以乙腈和水-0.1%甲酸-2mmol/L乙酸铵溶液流动相,流速0.3 mL/min,梯度洗脱,同时鉴定、定量茯苓不同药用部位茯神、茯苓、赤茯苓及茯苓皮中茯苓三萜类化合物,应用Peak View 2.1和MultiQuant 3.0软件分别对数据进行定性及定量分析;应用MarkerView 1.2.1软件对数据进行PCA聚类分析及t-检验。结果:总结了8种茯苓三萜类化合物(1个羊毛甾-8-烯型三萜、4个羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜、3个3,4-开环-羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜)的质谱裂解规律,据此推断3,4-开环-羊毛甾-8-烯型三萜质谱裂解规律;鉴定出茯苓三萜类化合物51个,其中茯神中44个化合物,茯苓中46个化合物,赤茯苓中40个化合物,茯苓皮中39个化合物;49种茯苓三萜类化合物含量总和和大部分单一茯苓三萜类化合物在不同药用部位中的含量均是茯苓皮>赤茯苓>茯神>茯苓;通过pca法寻找的茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮差异化合物为茯苓新酸d、松苓酸,通过t-检验寻找的茯神与茯苓、赤茯苓、茯苓皮的差异化合物为26-羟基茯苓新酸g、16α-乙酰氧基-羊毛甾-8,24-二烯-21酸、羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸,茯苓与茯神、赤茯苓、茯苓皮间无差异化合物,赤茯苓与茯神、茯苓、茯苓皮的差异化合物为茯苓新酸b、羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸,茯苓皮与茯神、茯苓、赤茯苓差异化合物为松苓酸、茯苓新酸b;按形态学由里及表的顺序茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮中3,4-开环-羊毛甾三萜类化合物含量相对增高,而闭环羊毛甾三萜类化合物含量相对降低。结论:首次建立了uplc-qtof-ms/ms同时鉴定、定量茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮中茯苓三萜类化合物的方法,该法简单、灵敏、专属,实现了一针进样同时定性定量分析,并比较分析了茯苓不同药用部位中茯苓三萜类化合物含量差异,为不同药用部位药理机制的阐明提供理论依据。第二部分赤茯苓质量标准研究目的:建立赤茯苓质量标准,有效控制赤茯苓质量。方法:参考《中国药典》2015年版四部通则,对12批赤茯苓样品进行分析。通过查阅文献对赤茯苓进行本草考证,采用性状鉴别法、显微鉴别法、薄层鉴别法进行鉴别,测定水分、总灰分、酸不溶性灰分含量进行检查,采用热浸法测定浸出物含量。结果:确定了赤茯苓基源;赤茯苓性状特征为呈立方块状或方块状厚片,大小不一,浅棕色或棕色,质坚实,气微,味淡,嚼之粘牙;粉末显微特征为本品粉末浅棕色或棕色,不规则颗粒状团块和分枝状团块棕红色,菌丝浅棕色、棕色或深棕色,细长,稍弯曲,有分枝,直径2~8μm,少数至11μm,长短不一;薄层色谱鉴别显示4种不同药用部位的6个主斑点显色清晰,分离度达到要求,尤其将茯苓和赤茯苓明显区分,该分离条件受温度和湿度影响较小;水分测定结果为9.0%~17.2%,平均值为14.0%;总灰分测定结果为0.5%~1.4%,平均值为0.9%;酸不溶性灰分测定结果分别为0.1%~0.9%,平均值为0.4%;醇溶性浸出物测定结果为6.6%~18.6%,平均值为11.6%。结论:总结了赤茯苓性状和粉末显微鉴别特征;建立了具有良好专属性及耐用性的薄层色谱鉴别方法;制定了水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的限度,进而建立了赤茯苓质量标准,为有效控制赤茯苓质量提供了依据。