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细胞免疫在抑制肿瘤的生长和转移的过程中扮演重要角色，T细胞作为细胞免疫的主体，在肿瘤治疗中的重要地位不可忽视。T细胞在负向调节分子的作用下常会导致肿瘤细胞的免疫逃逸，针对T细胞表面负向调节蛋白作用的抑制，已成为肿瘤相关研究发展的必然趋势。PD-1表达于活化T细胞表面，充当免疫反应中的共刺激分子，其通过负调控影响T细胞功能甚至致使其凋亡从而致使肿瘤细胞免疫逃逸的发生。近年来，将PD-1选作靶点的药物已受到了越来越广泛的重视，相关抗体类药物已经通过FDA认证。但是，抗体类药物免疫原性强，生产和储存难度大，影响了其推广使用，而针对PD-1蛋白的适配体可以解决抗体所面对的困境，为细胞免疫治疗提供新策略。
目的：用细胞进行体外筛选，取得特异性识别PD-1(programmeddeath-1，人程序性死亡分子1)分子的DNA序列并对其功能进行鉴定。将筛选出的结合率最高的适配体与文献中所报道的适配体，联合形成双价适配体以提高其封闭作用，对T细胞表面的PD-1蛋白进行有效封闭。
方法：本此实验主要采用细胞筛选的方法，首先，用CRISPER/Cas9技术在293T细胞系中敲入PD-1基因，使之可以稳定表达PD-1蛋白并以其作为靶细胞即正筛细胞，以野生型293T细胞系作为对照细胞即反筛细胞，并以两株细胞之间的差异作为我们筛选的基础。而后，人工合成ssDNA文库包括45个随机碱基与上下游固定序列。通过筛选轮数的逐步增加，不断地与靶细胞孵育收集，与反筛细胞孵育丢弃，直到文库中可与靶细胞的结合的ssDNA富集达到饱和，对产物进行TA克隆并测序。通过对测序结果的分析，找出可以与靶标结合的目的序列。最后，由于本次实验筛选出的适配体结合率不理想，我们采用了有最佳结合能力的候选适配体进行序列与文献中适配体连接形成双价适配体，并对其封闭功能进行体外验证。
结果：1.在经历过12轮的筛选后，获得了4条能特异的结合于靶细胞即293T-PD-1的核酸适配体，分别命名为Apt-1、Apt-2、Apt-3、Apt-4。其中Apt-4结合率相对较高。2.将具有最强亲和力的适配体Apt-4与文献报道中的PD-1-Apt相连接并有效提高其对抗原的封闭能力。
结论：本研究利用细胞筛选出能于PD-1靶标结合的PD-1适配体，并通过将两种适配体茎环相连接设计合成双价适配体从而有效提高其对靶蛋白的封闭能力。
目的：用细胞进行体外筛选，取得特异性识别PD-1(programmeddeath-1，人程序性死亡分子1)分子的DNA序列并对其功能进行鉴定。将筛选出的结合率最高的适配体与文献中所报道的适配体，联合形成双价适配体以提高其封闭作用，对T细胞表面的PD-1蛋白进行有效封闭。
方法：本此实验主要采用细胞筛选的方法，首先，用CRISPER/Cas9技术在293T细胞系中敲入PD-1基因，使之可以稳定表达PD-1蛋白并以其作为靶细胞即正筛细胞，以野生型293T细胞系作为对照细胞即反筛细胞，并以两株细胞之间的差异作为我们筛选的基础。而后，人工合成ssDNA文库包括45个随机碱基与上下游固定序列。通过筛选轮数的逐步增加，不断地与靶细胞孵育收集，与反筛细胞孵育丢弃，直到文库中可与靶细胞的结合的ssDNA富集达到饱和，对产物进行TA克隆并测序。通过对测序结果的分析，找出可以与靶标结合的目的序列。最后，由于本次实验筛选出的适配体结合率不理想，我们采用了有最佳结合能力的候选适配体进行序列与文献中适配体连接形成双价适配体，并对其封闭功能进行体外验证。
结果：1.在经历过12轮的筛选后，获得了4条能特异的结合于靶细胞即293T-PD-1的核酸适配体，分别命名为Apt-1、Apt-2、Apt-3、Apt-4。其中Apt-4结合率相对较高。2.将具有最强亲和力的适配体Apt-4与文献报道中的PD-1-Apt相连接并有效提高其对抗原的封闭能力。
结论：本研究利用细胞筛选出能于PD-1靶标结合的PD-1适配体，并通过将两种适配体茎环相连接设计合成双价适配体从而有效提高其对靶蛋白的封闭能力。