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新生儿缺氧缺血性脑损伤（hypoxia ischemia brain damage,HIBD）是造成小儿中枢神经系统损害的重要原因，其发病机制尚不完全清楚且无特效治疗措施。因此积极地阐明HIBD发病机制及寻找积极有效的治疗措施成为国内外共同关注的课题。新近研究发现，神经元凋亡在HIBD的发病机制中占有重要地位，其中，一组半胱氨酸蛋白酶即Caspase在凋亡的发生中发挥关键作用。IAPs（inhibitor of apoptosis）家族是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制剂家族，其中X—连锁的凋亡抑制剂（X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP）不但能抑制调控Caspase（Caspase-9）的活化，还能抑制效应Caspase（Caspase-3、-7）的活化，因而具有全面抗凋亡作用。国内外尚未见有关XIAP对新生鼠HIBD的保护作用的研究。本研究采用XIAP转基因新生小鼠在缺氧缺血后以脑损伤神经病理学评分、脑组织丢失体积、脑梗塞体积、脑萎缩体积、脑损伤程度肉眼积分、脑内Caspases活性等作为观测指标，探讨XIAP过度表达对HIBD的保护作用及其机制。 对象： （1） XIAP过度表达组（XIAP组）：新生9日龄XIAP过度表达转基因C57BL／6型小鼠79只，不拘性别，随机又分为缺氧缺血（Hypoxia Ischemia,HI）后3h组12只；24h组12只；72h组11只；5d组26只。生后9d及12d正常对照组各9只。 （2） 野生型组（Wt组）：同期新生9日龄野生型C57BL／6小鼠82只，不拘性别，随机又分为HI后3h组11只；24h组10只；72h组9只；5d组31只；2003年硕士研究生毕业论文X一染色体连锁的凋亡抑制剂（x IAP）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用生后gd及12d正常对照组分别为11只和10只。各组动物在体重、性别、年龄等方面均无显著差异。方法: （1）新生鼠HIBD模型制做:9日龄新生小鼠经3一4%氟烷吸入麻醉后，解剖显微镜下结扎左侧颈总动脉，于手术记时Zh后吸入9.9%氧气60min，对照组动物既不手术也不缺氧。 （2）微管相关蛋白一2（MAPZ）免疫组化染色:Hl后5d，副醛经心脏灌注处死动物，取出脑组织固定后，常规脱水包埋，切片、片厚5林m。每50张取一张，ABC法进行MAP:免疫组化染色。 （3）C哪ases活性测定:9日龄新生小鼠Hl后3h、24h、72h及gd、1 Zd正常对照断头取脑分离出左右大脑皮层，手工匀浆，4℃92009离心1 smin，上清液为胞浆成份用于casPases的活性测定。 （4）XIAP和XIAP相关因子一l（Xl砂一assoeiated factor一l，XAF一l）免疫荧光染色:观察XIAP与XAF一1在神经细胞中的的分布及相互关系。 （5）研陌stemblot:测定脑组织XIAP蛋白表达变化。 （6）脑梗塞体积的测量:将M妙2免疫组化切片（每50张取l张，片厚扣m）利用Micro Image软件测量每张切片MAPZ阴性区域面积及阳性区域面积，利用公式计算梗塞体积。 （7）脑损伤神经病理学评分:结合MAP:免疫组化染色和常规HE染色，依据神经病理学评分标准对脑组织损伤程度进行评分。 （8）统计学处理:所有结果均以X士SD表示，均数的比较采用非配对t检验。P<0.05为差异显著，统计数据利用statView软件运行。结果: （1） WestemBfot结果显示，XIAP表现为57kDa的单一条带，半定量分析发现XIAP表达在转基因组明显高于野生型组。 （2）HI后sd，XIAP过度表达小鼠脑损伤神经病理学评分在皮层、海马、纹状体、丘脑各部位均较野生型小鼠明显降低，其下降程度分别为皮层29.9%（P<0.0001），海马19，2%（P<0.001），纹状体13.5%（P=0.003），丘脑10.3%（P=0.035）。2003年硕士研究生毕业论文X一染色体连锁的凋亡抑制剂（xIAP）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用 （3）Hl后sd，XIAP组脑损伤程度肉眼积分、脑组织丢失体积、萎缩体积及脑梗塞体积均明显小于野生组（P<0.0001，P<0.0001，P<0.0001，P<0.05）。 （4）Hl后野生组Caspase一3活性在3h即明显升高（p<0.0004），24h达到峰值（p<0.0001），在72h仍明显高于正常对照组。XIAp组Ca印ase一3活吐在Hl后24h较正常对照组明显增加（P<0.0001），但在Hl后3h及72h与正常对照组相比无差异。Hl后各时间点CasPase一3活性升高程度在两组中存在明显差别，野生组升高更为显著。 （5）Hl后24h，XIAp组Caspase一9活胜明显低于野生组（p=0.0008）。 （6） XIAP与XAF一1免疫荧光双染色显示，X认P分布在胞浆，XAF一1分布在细胞核，XIAP与XAF一1共同阳性的细胞表现为核浓缩。结论: （l）转基因后XIAP过度表达的小鼠在Hl后脑组织神经病理学积分、脑组织丢失体积、梗塞体积、萎缩体积、损伤程度肉眼积分均低于野生组，说明XIAP对HIBD有保护作用。 （2） XIAP过度表达导致Hl后Caspases活性受到抑制，说明XIAP通过抑制Caspases活性而起到脑保护作用。 （3）HI后部分XIAP与XAF一1双标记的细胞表现为核浓缩，呈现凋亡的核形态改变，表明XIAP的抗凋亡作用还存在着某些负调节机制。