河豚毒素的快速检测方法研究

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河豚鱼是指硬骨鱼纲豚形目豚科的各属鱼类,其内脏含有河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX),人畜误食后均能致死。TTX致死剂量为0.5mg/70kg。我国食品卫生部门一直禁止鲜食河豚鱼及其加工制品。 TTX的检测方法主要由日、美两国开发掌握,包括生物法、液相法、荧光检测法、气相及气质联用、电泳法等等。本研究探索并建立了两种快速的检测TTX的方法。 第一种方法是利用酶的高度选择性,通过检测TTX的衍生物来检测TTX。即将TTX用碱处理,反应生成C9碱与草酸盐,通过草酸氧化酶与辣根过氧化物酶来检测草酸盐。草酸盐的生成量与TTX的量成比例关系,从而可以由草酸盐的检测结果推断出TTX的含量。该方法的检测限为2.5μmol/L,线性范围为4.5μmol/L-45μmol/L,批内与批间变异系数;≤10%。此方法为国内外首创的方法。该类方法利用了酶的高度选择能力,可以保证检测的特异性。同时酶法检测时间短,过程易控制,对提取操作要求低,不需要昂贵的仪器设备。该方法可作为一种快速的筛选方法。 第二种方法是免疫学方法,即通过制备TTX的单克隆抗体或抗血清,以酶联免疫吸附检测法检测TTX。本研究使用甲醛将TTX与匙孔槭血蓝蛋白交联,通过免疫BaLB/C小鼠与新西兰兔制备TTX抗血清。通过以TTX与牛血清白蛋白的甲醛交联物做包被抗原,建立了间接竞争 ELISA法检测TTX的方法。该方法的检测限为 5ng/kg,线性范围为10ng/kg-300ng/kg,批内与批间变异系数介于10%—20%。本方法利用了抗体的高度特异性,抗干扰能力较强。同时检测耗时短,检测限量低,过程易控制,可作为一种快速定量检测TTX的方法。 利用固定化酶法与间接竞争ELISA法检测了河豚鱼肝脏中的TTX的含量,并与小鼠生物试验的检测结果进行了对照。发现该两种方法的检测结果与小鼠生物试验的检测结果相关性良好。对两种方法比较发现酶法适于高含量(≥1mg/kg)TTX的检测,间接竞争ELISA法更适于低含量河豚毒素的快速检测方法研究(三lmg/kg)TTx的检测。两种方法之间具有良好的互补性。这两种快速检测TTX方法的建立,可为在全国范围内进行有毒河豚调查,摸清我国有毒河豚鱼种,加强河豚鱼的卫生管理,预防河豚鱼食物中毒,并在确保消费者健康安全的前提下,有条件的开放鲜河豚鱼市场,促进我国经济的发展作出贡献。
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