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目的:钼是机体所必需的元素之一,在维持身体机能中起着不可忽视的作用。当前研究表明高剂量的钼对动物机体生殖系统有严重影响,主要集中于曲精小管、精子、交配产仔参数方面,鲜有钼对下丘脑—垂体—性腺轴影响方面的报道。本研究旨在探讨不同浓度钼对大鼠下丘脑—垂体—睾丸轴的影响,以期为研究过量钼对雄性大鼠生殖系统造成不良影响的机制提供参考依据。
方法:选取3周龄清洁级Wistar雄性健康大鼠80只,适应性饲养1周,随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组,每组20只。基础日粮相同,正常饮水,分别在饮水中添加钼酸钠(以钼离子计)0、200、500、800 mg/L,试验周期42 d。分别于试验第0、14、28、42 d,每组随机挑选5只,采集血液、下丘脑、垂体及睾丸组织,称取体重及脏器重量并计算脏器指数;用试剂盒法检测血清及睾丸中SOD、XOD、MDA活性或含量;用ELISA法检测大鼠血清及相应组织中GnRH、FSH、LH、T、E2含量;用HE染色法观察下丘脑、垂体、睾丸形态学变化;用透射电镜技术观察睾丸组织的超微结构变化;用TUNEL法检测睾丸凋亡细胞数。
结果:(1)较Ⅰ组相比,14 d至42 d,Ⅲ、Ⅳ组大鼠增重明显减少,垂体及睾丸绝对重量显著下降(P<0.05),下丘脑、垂体、睾丸的脏器指数无显著差异(P>0.05)。
(2)较Ⅰ组比,28、42 d,Ⅲ、Ⅳ组大鼠血清及睾丸SOD和XOD活性明显下降(P<0.05)、MDA含量显著升高(P<0.05);随染钼时间延长,Ⅱ组大鼠血清及睾丸SOD和XOD的活性、MDA含量亦发生明显改变(P<0.05)。
(3)较Ⅰ组比,14、28 d,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血清及下丘脑GnRH含量升高(P<0.05, P<0.01);14、28、42 d,Ⅲ、Ⅳ组大鼠血清及睾丸组织T含量下降、E2含量上升(P<0.05, P<0.01)。
(4)较Ⅰ组比,42 d时,Ⅱ组大鼠下丘脑出现少量水肿神经细胞,Ⅲ、Ⅳ组大鼠下丘脑神经元数目明显减少,水肿的神经细胞数量加剧;Ⅲ、Ⅳ组大鼠垂体细胞减少,排列不规整、界限模糊,血窦明显扩张;Ⅱ组大鼠睾丸生精小管管壁结构稍有疏松,Ⅲ、Ⅳ组生精小管结构完整性发生改变,管腔基膜结构模糊且明显皱褶,各级生精细胞排列松散,管腔成熟的精子明显减少,精子及生殖细胞内线粒体肿胀,甚至空泡化,顶体膜较正常精子明显改变;Ⅲ、Ⅳ组睾丸阳性细胞数量明显增多。
结论:饮水钼添加量≥500 mg/L导致大鼠明显生长抑制,垂体及睾丸重量降低,造成大鼠睾丸抗氧化能力明显下降,凋亡细胞数增加,生殖激素分泌紊乱。高钼引起大鼠下丘脑—垂体—睾丸轴生殖激素分泌紊乱,也是钼中毒产生生殖毒性的机制之一。
方法:选取3周龄清洁级Wistar雄性健康大鼠80只,适应性饲养1周,随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组,每组20只。基础日粮相同,正常饮水,分别在饮水中添加钼酸钠(以钼离子计)0、200、500、800 mg/L,试验周期42 d。分别于试验第0、14、28、42 d,每组随机挑选5只,采集血液、下丘脑、垂体及睾丸组织,称取体重及脏器重量并计算脏器指数;用试剂盒法检测血清及睾丸中SOD、XOD、MDA活性或含量;用ELISA法检测大鼠血清及相应组织中GnRH、FSH、LH、T、E2含量;用HE染色法观察下丘脑、垂体、睾丸形态学变化;用透射电镜技术观察睾丸组织的超微结构变化;用TUNEL法检测睾丸凋亡细胞数。
结果:(1)较Ⅰ组相比,14 d至42 d,Ⅲ、Ⅳ组大鼠增重明显减少,垂体及睾丸绝对重量显著下降(P<0.05),下丘脑、垂体、睾丸的脏器指数无显著差异(P>0.05)。
(2)较Ⅰ组比,28、42 d,Ⅲ、Ⅳ组大鼠血清及睾丸SOD和XOD活性明显下降(P<0.05)、MDA含量显著升高(P<0.05);随染钼时间延长,Ⅱ组大鼠血清及睾丸SOD和XOD的活性、MDA含量亦发生明显改变(P<0.05)。
(3)较Ⅰ组比,14、28 d,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血清及下丘脑GnRH含量升高(P<0.05, P<0.01);14、28、42 d,Ⅲ、Ⅳ组大鼠血清及睾丸组织T含量下降、E2含量上升(P<0.05, P<0.01)。
(4)较Ⅰ组比,42 d时,Ⅱ组大鼠下丘脑出现少量水肿神经细胞,Ⅲ、Ⅳ组大鼠下丘脑神经元数目明显减少,水肿的神经细胞数量加剧;Ⅲ、Ⅳ组大鼠垂体细胞减少,排列不规整、界限模糊,血窦明显扩张;Ⅱ组大鼠睾丸生精小管管壁结构稍有疏松,Ⅲ、Ⅳ组生精小管结构完整性发生改变,管腔基膜结构模糊且明显皱褶,各级生精细胞排列松散,管腔成熟的精子明显减少,精子及生殖细胞内线粒体肿胀,甚至空泡化,顶体膜较正常精子明显改变;Ⅲ、Ⅳ组睾丸阳性细胞数量明显增多。
结论:饮水钼添加量≥500 mg/L导致大鼠明显生长抑制,垂体及睾丸重量降低,造成大鼠睾丸抗氧化能力明显下降,凋亡细胞数增加,生殖激素分泌紊乱。高钼引起大鼠下丘脑—垂体—睾丸轴生殖激素分泌紊乱,也是钼中毒产生生殖毒性的机制之一。