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目的:本研究检测胃癌组织和细胞系中白血病抑制因子(Leukemia Inhibitory Factor,LIF)的表达量,研究过表达/敲低LIF影响胃癌细胞生物学特征的表现,在组织和细胞水平上探讨LIF表达水平与胃癌的关系及其意义。方法:1.通过免疫组织化学技术、Western blot检测胃癌组织与相邻的非肿瘤组织中LIF的表达情况,通过免疫组化芯片分析LIF的表达水平与患者临床病理参数的关系。2.通过Western blot检测不同胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞株中LIF的表达情况。3.构建含目的基因的质粒载体,将慢病毒感染LIF低表达细胞株培养得到稳转细胞株。细胞功能学试验,如MTT实验、平板克隆形成实验、流式细胞术、裸鼠皮下成瘤实验等,依次检测过表达LIF对胃癌细胞生物学特性的影响。4.构建敲低LIF基因的细胞系模型作为对照,检测LIF敲低后对胃癌细胞生物学特性的影响。结果:1.免疫组织化学技术染色显示90例胃癌组织芯片中LIF的阳性率低于相邻的非肿瘤组织,其分析结果显示患者LIF表达与病理分级有关(P<0.01)。2.通过Western blot检测6例胃癌组织,结果显示5例胃癌组织中LIF蛋白的表达量低于正常胃黏膜组织。3.Western blot检测胃癌细胞株(SGC-7901、MKN-45、BGC-823)和正常胃黏膜上皮细胞株(GES-1)中LIF蛋白的相对表达水平,结果显示3株胃癌细胞株的LIF相对表达水平低于正常胃黏膜上皮细胞株。4.成功构建稳定表达LIF的胃癌细胞稳转株BGC-823/LIF和MKN-45/LIF,MTT实验结果显示BGC-823/LIF和MKN-45/LIF组与控制组相比较,细胞增殖速率明显下降(P<0.05)。平板克隆形成实验进一步证明了过表达LIF能够抑制胃癌细胞克隆形成(P<0.001)。裸鼠皮下成瘤实验显示:BGC-823/LIF组形成的肿瘤重量明显低于BGC-823/CTRL组(P<0.001)。5.流式细胞术分析显示,BGC-823/LIF组和MKN-45/LIF组与对照组对比在G1期细胞明显增多(P<0.05),同时处在S期的细胞数量下降,说明过表达LIF引起胃癌细胞在G1期的积累,细胞周期阻滞在G1期。6.胃癌细胞株BGC-823敲低LIF后,MTT实验结果显示BGC-823/siLIF-2组与对照组相比较,细胞增殖速率明显上升(P<0.05)。平板克隆形成实验MKN-45敲低LIF表达后,克隆形成也有显著的提高,再次证明了这一结果(P<0.01)。7.检测细胞周期相关蛋白,我们发现过表达LIF刺激p21表达增高,抑制Cyclin D1表达,敲低LIF表达后结果相反。结论:1.胃癌组织与相邻的非肿瘤组织中LIF的表达程度不同,LIF在胃癌组织中低表达,提示LIF在胃癌形成过程中起了明显的作用,在胃癌的演变过程中具有抑癌的功能。LIF表达水平高低与胃癌病理分级有关。2.过表达LIF的胃癌细胞,其增殖能力明显降低,而敲低LIF的胃癌细胞其增殖能力升高,说明LIF影响胃癌的增殖。3.通过流式细胞术分析过表达LIF的胃癌细胞系在G1期细胞增多,S期细胞数减少,进一步检测周期相关蛋白,我们发现过表达LIF刺激p21表达增高并抑制Cyclin D1表达导致细胞阻滞在G1期。