【摘 要】
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颅脑损伤(Traumatic Brain Injury,TBI)是一种由于外力作用所导致的脑部创伤,全球范围内每年约有超过5000万人患有颅脑损伤,如不加以关注,TBI将会导致一系列后遗症从而对患者造成长期困扰。快速、可靠地识别颅内病变患者、区分严重级别,对于避免创伤后并发症和继发性脑损伤至关重要。相较于计算机断层扫描(CT)和核磁共振成像(NMR)成像技术,使用血清颅脑损伤生物标志物的检测手段更
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颅脑损伤(Traumatic Brain Injury,TBI)是一种由于外力作用所导致的脑部创伤,全球范围内每年约有超过5000万人患有颅脑损伤,如不加以关注,TBI将会导致一系列后遗症从而对患者造成长期困扰。快速、可靠地识别颅内病变患者、区分严重级别,对于避免创伤后并发症和继发性脑损伤至关重要。相较于计算机断层扫描(CT)和核磁共振成像(NMR)成像技术,使用血清颅脑损伤生物标志物的检测手段更快捷、更精确,且对于优化CT扫描临床决策、降低二次辐射伤害具有显著临床价值。研究发现,胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)是鉴别诊断TBI严重级别的重要生物标志物之一。为了实现对GFAP的快速、精准检测,本研究建立了一种针对GFAP的磁定量免疫层析检测系统。该系统的构建包括免疫探针制备和层析系统优化两个部分。在免疫探针制备方法研究过程中,我们重点关注抗体的固定化策略,系统研究了抗体与磁性纳米材料固定化过程中的缓冲液类型、p H值、抗体投量等因素对抗体偶联效率及优势定向的影响,从而获得了最佳性能的GFAP免疫探针。在此基础上,我们对层析系统进行了细致的条件优化,筛选出最适GFAP抗体组合、独立质控、探针混合比、层析工作液及抗原稀释液等,有效提升了检测灵敏度,达到临床应用需求。最后,对上述构建的磁定量免疫层析系统进行了分析性能评估。结果显示,该体系的最低检测限为0.022 ng/m L,检测范围为0.05 ng/m L-20 ng/m L(R~2=0.98)。通过重复性实验、回收率实验、抗干扰实验,验证了体系具有良好的特异性、重复性和准确性。GFAP磁定量免疫层析即时检测系统的构建,将为有效减少TBI患者临床诊断时间及优化CT扫描临床决策奠定基础。
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