血栓弹力图TCA6000参考值范围实验室重建及临床应用研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guigui198302
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目的:
  1.本研究通过测定浙江地区成人健康人群血栓弹力图(TCA6000)数值和快速血栓弹力图(r-TCA6000)数值,实验室自建本地区的r-TCA6000快速血栓弹力图的参考范围。同时对比健康志愿者与医院围手术期患者样本的各项TCA血栓弹力图参数。
  2.本研究基于重建血栓弹力图的参考值范围,通过体外模拟人体凝血全貌实验过程中,利用肝素和低分子肝素作用后人体血液标本,评估血栓弹力图TCA-6000仪器及TEG-5000仪器相关性,灵敏度以及精准度。
  3.本研究基于重建血栓弹力图的参考值范围,通过体外模拟人体凝血全貌实验过程中,评估Ca2+浓度梯度变化对人体凝血过程的相关因素的影响。进而评估患者的Hb、HCT血常规的指标高低变化对对人体凝血过程的相关结果的影响。
  4.本研究基于重建血栓弹力图的参考值范围,准确合理的体外评价震荡保存和冰冻保存相同时间的血小板在凝血方面功能差异。
  5.本研究基于重建血栓弹力图的参考值范围结合皮冠状动脉介入治疗术(PCI)后患者CYP2C19基因型不同检测结果,通过血栓弹力图检测这些患者的ADP抑制率,探讨患者对氯吡格雷药效的影响。
  方法:
  1.采用TCA6000血栓弹力图检测被选取的健康志愿者,统计分析r-TCA6000的ACT,R,K,ANGLE(α),MA以及TCA6000的R,K,ANGLE(α),MA,CI。
  2.抽取3份志愿者枸橼酸抗凝静脉血,在待测血样中加入肝素,使终浓度分别为0.0u/ml,0.1u/ml,0.2u/ml,0.3u/ml,0.4u/ml,0.5u/ml,0.6u/ml。采用TCA-6000及TEG-5000同时进行普通杯测试,检测血栓弹力图-R值。对血栓弹力图-R值进行相关性分析,并对比两台仪器的敏感性和精密度。
  3.健康志愿者真空采集静脉血置于枸橼酸钠抗凝管,按采血和抗凝的标准要求充分摇匀。(1)在血栓弹力图检测过程中加入5μL、10μL、20μL、30μL不同含量的的钙离子试剂于相应的反应空白杯中,以测定不同含量的的钙离子试剂对血小板血栓弹力图-MA值的影响。(2)利用生理盐水稀释配制不同浓度血红蛋白的实验用血组别,以测定不同浓度血红蛋白对血小板血栓弹力图-MA值的影响。
  4.采集健康人的血小板,等分成2等分,选用5%的DMSO作为血小板在-80℃低温冷冻保存的保护剂,分别震荡储存和冷冻保存4天。然后分别对震荡储存4天和冷冻保存4天后,对不同保存方式的血小板用血栓弹力图检测MA值和用流式细胞仪检测CD62p值并相互比较。
  5.依据CYP2C19基因型将经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)后患者分为三组:Ⅰ组为正常基因纯合子组,Ⅱ组为正常基因与突变基因杂合子组,Ⅲ组为突变基因纯合子或杂合子组。入选患者测定血小板ADP抑制率。
  结果:
  1.健康志愿者的快速血栓弹力图(r-TCA6000)各个参数的正常参考范围分别为R:22.80-75.60sec、K:48.00-106.62sec、ANGLE(α):69.75-82.07°、MA:57.26-79.42mm、ACT:85.50-170sec。
  2.健康志愿者的血栓弹力图(TCA6000)各个参数的正常参考范围分别为R:4.40-10.20min;K:1.22-3.49min;ANGLE:52.75-73.49°;MA:53.00-73.70mm;CI:-4.77-2.50。
  3.两台仪器各组别R值进行相关性分析,r值均大于0.975,具有很好的相关性。
  4.不同含量的钙离子对血栓弹力图-MA值的相关性影响:MA:5μL组为(39.13±12.53)mm;10μL组为(63.15±7.18)mm、20μL组为(60.36±8.31)mm与30μL组为(59.45±6.695μL)mm。5μL组与其他组别均有显著性差异,10μL与20μL两组不同含量的钙离子对血栓弹力图-MA值影响无显著性差异,10μL与30μL两组不同含量的钙离子对血栓弹力图-MA值影响有显著性差异。血红蛋白对血栓弹力图-MA值的影响:各组之间均有显著性差异。MA值与血常规参数红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积、血小板计数、平均血小板体积、血小板压积相关性极强。
  5.冰冻血小板的血栓弹力图MA(45.01±13.23)值大于新鲜血小板的血栓弹力图MA(40.48±13.55),说明冰冻血小板体外凝血功能强于新鲜血小板,而冰冻血小板CD62p含量(23.94±2.69%)小于新鲜血小板(56.15±2.12%),说明冰冻血小板聚集功能强于新鲜血小板。
  6.依据基因CYP2C19分类的三组患者,其血栓弹力图ADP抑制率均存在统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  1.TCA6000临床实验室应根据本地区人群的特点,建立符合本地区健康成年人TCA6000血栓弹力图参考值范围以及快速血栓弹力图参考值范围,从而为临床急诊诊断提供科学的参考指标,以方便临床医师精准的评估出患者的凝血状况。
  2.基于肝素和低分子肝素的体外抗凝的特性,对比TCA-6000仪器及TEG-5000仪器的普通杯测试,其结果有较好的相关性;TCA-6000对普通肝素和低分子肝素的检测敏感性略高于TEG-5000,而TEG-5000在精密度上略好于TCA-6000。
  3.本文探究血红蛋白的浓度、加入的钙离子的量等相关因素对体外模拟凝血全貌过程中R值、MA值、ANGLE值和CI值的影响。对于血红蛋白的浓度变化过于剧烈的患者对于血栓弹力图的结果是有影响。而钙离子务必保证用20μL才能对实验影响最小。
  4.冰冻血小板比新鲜血小板在体外实验中有更强的凝血功能。血小板冷冻后长期存储,以便满足临床越来越多的缺乏血小板需求。
  5.PCI术后患者中,携带正常基因CYP2C19*1的患者氯吡格雷药效要明显优于突变基因纯合子或杂合子的患者。
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