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目的:探究冰片、薄荷脑、绿原酸及蛇床子素的体外抗炎作用,筛选复方金黄妇科泡腾片的处方并探究其制备工艺。方法:1)用LPS活化RAW264.7细胞进行造模,CCK-8法测定细胞活力,确定冰片和LPS的用药剂量。给药24 h后观察细胞一般形态;一步法测定NO含量;Western blotting法检测各组MAPK、Nrf2/HO-1和NF-κB通路相关蛋白的表达变化;DCFH-DA荧光探针法检测ROS含量变化。2)用LPS活化RAW264.7细胞进行造模,MTT法检测细胞存活率优化薄荷脑给药剂量。给药24 h后观察细胞一般形态;一步法测定NO的含量;Western blotting法测定各组HO-1蛋白的表达情况及MAPK通路中蛋白的磷酸化水平。3)用LPS活化RAW264.7细胞进行造模,MTT法检测细胞存活率优化绿原酸给药剂量。给药24 h后观察细胞一般形态;Western blotting法测定各组HO-1蛋白的表达情况及MAPK通路中蛋白的磷酸化水平。4)用LPS活化RAW264.7细胞进行造模。给药24 h后观察细胞一般形态;MTT法检测细胞增殖率;一步法测定NO含量;ELISA法用于检测培养液中IL-1β、PGE2和ICAM-1的含量;iNOS和COX-2 mRNA的表达水平用RT-PCR法检测;MCP-1蛋白和Nrf2/HO-1、MAPK、NF-κB及JAK2/STAT3通路中蛋白表达用Western blotting法分析;ROS的表达用DCFH-DA荧光探针法检测。5)单因素考察法用于筛选酸碱源、稀释剂、粘合剂、润滑剂及崩解剂及其用量,冰片、薄荷脑用β-CD进行包合,采用酸碱分开制粒后混合压片的方法制备泡腾片,并以颗粒流动性、片剂硬度、pH值、崩解时限等为指标探究其制备工艺并进行质量考察。结果:1)LPS浓度低于1.5μg/mL,冰片浓度低于600μg/mL时,对细胞活性无明显抑制作用,并优化出冰片减轻炎症的最适低、中、高浓度分别为1.5、15和150μg/mL,LPS浓度为1.2μg/mL。镜下可见,KB组和YX组细胞趋于正常;MX组细胞有较长的触角,形状不规则,且可见透明小泡;而冰片均能以剂量依赖的方式抑制LPS引起的细胞分化,显著降低NO和ROS的高表达。此外,冰片干预后,MAPK和NF-κB通路的蛋白表达下调,Nrf2蛋白表达上调。2)薄荷脑浓度低于400μg/mL,对细胞增殖无显著抑制,进一步优化出薄荷脑低、中、高浓度分别为1、10和100μg/mL。镜下可见,KB组细胞趋于正常;MX组细胞有较长的触角,形状不规则,且可见透明小泡;不同剂量薄荷脑组细胞形态和MX组类似,亦可见大量较长触角和空泡。同时,薄荷脑组NO含量和HO-1蛋白的表达及ERK蛋白的磷酸化水平与MX组相比,无明显统计学意义。3)绿原酸浓度在0-2 mg/mL时对细胞增殖无影响,但在0.5-2 mg/mL范围内其细胞增殖率出现负增长,因此选用50、100和200μg/mL分别作为绿原酸的低、中和高浓度进行后续实验。镜下可见,KB组细胞趋于正常;MX组细胞有较长的触角,形状不规则,且可见透明小泡;不同剂量绿原酸组细胞亦可见大量较长触角和空泡,形态和MX组类似。同时,绿原酸组HO-1蛋白的表达及ERK蛋白的磷酸化水平与MX组相比,无明显统计学意义。4)蛇床子素治疗后,细胞状态明显改变,浓度高于10μg/mL时,有减轻细胞损伤的作用,进一步优化出蛇床子素抑制细胞炎症的最适低、中和高浓度分别为20、40和80μg/mL。镜下可见,KB组和YX组细胞趋于正常,MX组细胞有较长的触角,形状不规则,且可见透明小泡,而蛇床子素均能以剂量依赖的方式抑制LPS引起的细胞分化,且能显著提高细胞增殖率、T-SOD、GSH和CAT含量;并抑制NO、IL-1β、PGE2、ICAM-1和MDA的高表达;降低i NOS和COX-2 mRNA的表达水平。此外,蛇床子素干预后,MAPK、NF-κB和JAK2/STAT3通路中蛋白表达水平、MCP-1蛋白表达及ROS含量明显下调,而Nrf2和HO-1蛋白表达明显上调。5)酒石酸和碳酸氢钠的用量比为3﹕1;乳糖﹕蔗糖﹕甘露醇﹕可溶性淀粉比例为5﹕5﹕2﹕2,作稀释剂;75%乙醇配制的7%PVP为粘合剂。经该工艺制备出的颗粒剂流动性好,且泡腾片外观均匀,p H值为4.0-5.0,硬度为2.5-3.1,能在5 min内全部崩解完毕。结论:冰片和蛇床子素在一定浓度范围内可剂量依赖性介导炎症介质水平和信号通路蛋白的表达,从而产生抗炎功效;薄荷脑不能抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症,但其可作为渗透促进剂加入到处方中;绿原酸不能抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症,但金银花具有清热解毒功效。该处方制备出的复方金黄妇科泡腾片质量考察符合药典规定,制备工艺具有可重复性。