基于半乳糖修饰的聚乙烯二氨基三嗪共聚物转基因载体

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本论文主要研究了半乳糖(Lac)修饰聚2-乙烯基-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪(PVDTLac)/聚2-乙烯基-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪(PVDT)共聚物的制备,及其与DNA形成氢键复合物的性质以及此复合物介导的基因转染,主要内容包括以下三个方面:1)对2-乙烯基-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪单体(VDT)进行半乳糖修饰,制备出PVDTLac-PVDT共聚物,所得产物具有较好的水溶性。经核磁共振氢谱(1H NMR)分析,确定半乳糖基成功地接到了三嗪环上。2)研究共聚物与DNA的相互作用情况,制备了不同比例的PVDTLac载体/DNA复合物,以复合物电泳和透射电镜表征了PVDTLac对DNA的作用,对DNA形态、尺寸等的影响。琼脂糖凝胶电泳实验表明PVDTLac载体可有效复合DNA,由于PVDTLac-PVDT(1:2)结构中有更多的氨基,故能以较小的质量比与DNA形成了复合物。通过透射电镜观察了复合物以及裸DNA的形态。复合物形态依赖于载体的比例,呈现球状、环状或大尺寸聚集物。在载体质量相对较小时,载体不能对DNA形成紧密的包裹,DNA保持松散的结构。随着质量比的增大,DNA逐渐被缩合,接近最佳复合比时,复合物的形态开始倾向于呈环状;再继续增大质量比,复合物呈分散的环状或球形。由透射电镜观测复合物的粒径分布得知,当载体达到一定质量后,随着载体质量的继续增加,复合物粒径有减小的趋势。3)以非洲绿猴肾细胞(COS-1)为宿主细胞,尝试了两种比例共聚物载体介导含Luciferase报告基因质粒的转染,通过测定luciferase的活性确定转染效率。结果表明,PVDTLac载体可将pGL3质粒成功转入COS-1细胞内,总体上的转染率比裸DNA高52~178倍,接近PEI转染效率的50%~74%。
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