【摘 要】
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目的:选取牙周致病菌的红色复合体和橙色复合体代表性细菌—P.gingivalis和F.nucleatum构建生物膜模型,研究共培养条件下两种菌的相互作用,及各时间点（12 h、24 h、48 h、72 h）生物膜产生AI-2信号的差异。同时,探究不同严重程度的慢性牙周炎人群中,龈下菌斑F.nucleatum和P.gingivalis Lux S基因含量的分布及其与菌数量的关系。方法:1、P.gin
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目的:选取牙周致病菌的红色复合体和橙色复合体代表性细菌—P.gingivalis和F.nucleatum构建生物膜模型,研究共培养条件下两种菌的相互作用,及各时间点（12 h、24 h、48 h、72 h）生物膜产生AI-2信号的差异。同时,探究不同严重程度的慢性牙周炎人群中,龈下菌斑F.nucleatum和P.gingivalis Lux S基因含量的分布及其与菌数量的关系。方法:1、P.gingivalis及F.nucleatum厌氧环境下,分别单独和联合培养12 h、24 h、48 h、72 h,使用扫描电镜观察生物膜的超微结构。同时收集两种菌单独和联合培养下三组的菌液上清,分别加入到报告菌株V.harveyi菌悬液中,利用菌上清中的AI-2诱导其生长,采用酶标仪检测V.harveyi产生的信号值,间接评估单独及共培养形成生物膜过程中产生的AI-2信号强度。2、选取2019年2月到2019年3月期间在新疆伊宁霍城县参与“新疆多民族自然队列研究”项目的患者,根据美国CDC慢性牙周炎诊断标准,将研究对象分为4组:牙周健康组、轻度牙周炎组、中重度牙周炎组。提取纸尖龈下菌斑总DNA,分别设计F.nucleatum和P.gingivalis Lux S和16s r RNA两种基因的特异性引物,采用荧光定量PCR技术进行检测。结果:1、体外生物膜构建及AI-2信号检测:1)10000倍扫描电镜下,生物膜超微结构中两种菌均呈现生长。2)两种菌单独培养比较:P.gingivalis和F.nucleatum两种菌产生AI-2信号强度存在显著差异（P<0.05）。六次检测中,P.gingivalis 12 h和24 h单独培养产生的AI-2的信号值高于F.nucleatum,但48 h之后,F.nucleatum的信号值要高于前者。3)菌单独和共培养比较:12 h和24 h培养的前三次检测中,AI-2信号强度大小为P.gingivalis组>P.gingivalis、F.nucleatum共培养组>F.nucleatum组;而在48 h和72 h培养的前三次检测中,AI-2信号强度大小为F.nucleatum组>P.gingivalis、F.nucleatum共培养组>P.gingivalis组。随着检测次数增加,AI-2信号分子衰弱,组间差异逐渐不明显。2、不同牙周状况人群,龈下菌斑F.nucleatum和P.gingivalis Lux S基因含量的分布及其与菌量的相关性:1)P.gingivalis Lux S和F.nucleatum 16s r RNA的含量在各组间分布不同,差异存在统计学差异（P<0.05）。F.nucleatum Lux S和P.gingivalis 16s r RNA的含量组间分布差异无统计学意义（P>0.05）。2)P.gingivalis和F.nucleatum两种菌的Lux S和16s r RNA浓度关系并非单调,Lux S的浓度均随16s r RNA的浓度呈现先上升到达峰值后再下降的趋势,P.gingivalis的浓度峰值为0.0172 ng/μL,而F.nucleatum的为0.25 ng/μL。结论:1、不依赖早期定植菌的情况下,生物膜形成的中期定植菌F.nucleatum能够与晚期定植菌P.gingivalis产生共聚集作用。2、在共聚集条件下,F.nucleatum产生的AI-2信号可能对促进P.gingivalis的生长。3、慢性牙周炎的严重程度与P.gingivalis菌的数量不相关,而可能与其Lux S基因存在相关性。4、慢性牙周炎的严重程度与F.nucleatum Lux S基因含量不相关,而与其菌的数量可能存在一定的相关性。
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