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不合理的饮食结构及日常运动量的降低,导致非酒精性脂肪肝(NAFLD)发病几率逐年提升,已成为威胁人类健康的一种常见的慢性代谢综合征,其临床症状为甘油三酯(TG)在肝脏的积累,致使肝脏出现功能性障碍。NAFLD是一类非良性的动态发展综合征,在早期肝细胞单纯性脂肪累积阶段,临床上一些常见的具有一定降脂效果的药物可逆转地降低胞内脂质含量,但大多是以损伤肝功能为代价。据报道某些膳食营养因子可通过特定的途径如加速线粒体β氧化、抑制肝细胞内脂肪酸的合成等,对肝脏脂质代谢起到一定的调节作用。研究发现某些海洋生物体内具有多种抗氧化成分,如多酚类、色素类物质等,但关于这些抗氧化成分的降脂效果的研究却鲜有报道。为进一步开发高效降脂的功能性食品,缓解NAFLD症状,本文以岩藻黄质、牛磺酸和褐藻多酚为原料,研究了这些活性物质体内外的降脂功效及机理。主要结论如下:1、海带多酚提取纯化工艺及成分鉴定:海带粉经乙醇浸提、XDA-7大孔树脂和硅胶树脂连续固相萃取后,高效液相色谱法(HPLC)确定其纯度为20.64%,且杂质含量较低,该工艺提取所需时间较短,一定程度上改进了传统柱层析耗时久导致多酚含量大幅度下降的缺点。采用制备型HPLC进一步纯化,经液质联用(LC-MS)和核磁共振(NMR)技术确定福建产褐藻—海带多酚主要成分是为6,6-二鹅掌菜酚(Dieckol),其分子量为742。实验时间所限,后续实验均采用20.64%纯度的褐藻多酚提取物。2、以肝细胞单纯性脂质累积为体外模型,评价褐藻多酚、岩藻黄质和牛磺酸的脂质清除效果及作用机理:0.50 mmol/L OA诱导刺激HepG2细胞24 h,胞内脂质含量是空白组6倍且无炎症发生,以此条件建立NAFLD体外模型。以岩藻黄质、牛磺酸和褐藻多酚干预NAFLD体外模型,结果发现活性物质干预24 h,与模型组相比,添加浓度均为1μg/mL时,岩藻黄质组胞内脂质清除率达到23%;牛磺酸组胞内脂质清除率达到13%;褐藻多酚提取物组胞内脂质清除率达到36%,其自身代谢组胞内脂质清除率达到23%。活性物质干预48 h,与模型组相比,添加浓度均为1μg/mL时,岩藻黄质组胞内脂质清除率达到61%;牛磺酸组胞内脂质清除率达到56%;而褐藻多酚提取物组胞内脂质清除率达到57%,其自身代谢组胞内脂质清除率达到54%。活性物质干预72 h结果与48 h无显著性差别。说明褐藻多酚降脂效果优于岩藻黄质和牛磺酸。活性物质起显著降脂作用需要一定的时间,而其在细胞本身的脂质清除方面有一定的辅助作用。其后研究活性物质降脂机理,以β氧化的几个相关因子AMPK、PPARα和CPT-1含量变化为依据,发现一定干预时间后,活性物质能显著提高AMPK、PPARα和CPT-1含量,通过加强线粒体β氧化起到降脂功效。3、褐藻多酚提取物体内降脂功效评价及作用机理研究:高脂饲料饲喂ICR小鼠,饲喂4周时,模型组小鼠肝脏TG含量是空白组的2.61倍,LDL含量是空白组1.17倍,且炎症因子ALT和AST水平无显著变化;延长饲喂时间,趋势不变,表明肝脏单纯性脂质累积模型具有较好的稳定性。褐藻多酚提取物干预下的不再给予高脂饲料刺激组在短时间内(4周)脂质清除率达到76%。相比之下,不再给予高脂饲料刺激仅靠自身肝脏脂代谢组脂质清除率达到59%,延长饲喂时间,在摄入高脂饮食的前提下以褐藻多酚提取物干扰的小鼠最高清除率达到53%。说明除去机体本身降脂效果,褐藻多酚提取物有一定的辅助功效,因此机体自身避免再次摄入高脂饮食,同时接受褐藻多酚的干预,可在短时间内显著降低脂质累积。进而研究其降脂机理,发现褐藻多酚提取物在体内脂肪代谢可能经AMPK-CPT-1途径,增加了肝细胞线粒体的脂肪酸β氧化,加速了脂肪酸的分解代谢。