【摘 要】
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目的:了解广西乙肝病毒和黄曲霉毒素B1双暴露肝细胞癌在mtDNA D-Loop区中是否具有特征的分子生物学指纹,以及其核苷酸序列的变异与HCC发生有无关系。方法:实验组:32例来自广
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目的:了解广西乙肝病毒和黄曲霉毒素B1双暴露肝细胞癌在mtDNA D-Loop区中是否具有特征的分子生物学指纹,以及其核苷酸序列的变异与HCC发生有无关系。方法:实验组:32例来自广西不同地区的未接受任何治疗、且单结节的HCC患者行根治性手术切除的肝细胞癌组织。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清学乙肝表面抗原了解患者是否感染乙肝病毒(乙肝病毒暴露);采用PCR结合直接测序检测患者p53第249密码子是否存在AGG>AGT/AGC突变(黄曲霉毒素B1暴露)。按患者有无HBV暴露及AFB1暴露将实验组分为A、B、C、D四个亚组。对照组:自身对照组I和自身对照组Ⅱ分别为实验组32例HCC患者自身的癌旁组织和外周血白细胞;正常对照组为8例来自肝移植供肝及部分肝血管瘤、肝外伤患者肝切除手术的正常肝组织。用PCR结合直接测序的方法检测各个组织样本中线粒体DNA D-Loop区的核苷酸序列,了解并分析其异同情况。结果:实验组HBsAg阳性率为71.9%;p53第249密码子AGG>AGT/AGC突变率为48.9%。32例HCC患者的肿瘤组织(7.6%)、癌旁组织(7.0%)和外周白细胞(7.6%)mtDNA D-Loop区序列中均检测到较高的碱基变异率,且显著高于正常对照组(2.7%,P<0.01)。同一 HCC患者的肿瘤组织、癌旁组织以及外周血白细胞的mtDNA D-Loop区碱基变异的位点基本一致,匹配率达92.8%～100.0%。在98个发生变异的位点中有81.6%为已报道的的多态性。其中5个位点发生点突变,17个位点出现18种新的多态性。所有组织样本中均发现 NT73A>G 和 NT263A>G;高频变异位点 NT150C>T、NT310T>CTC(NT309Cins 和 NT311Cins)、NT489T>C、NT16093T>C、NT16223C>T、NT16234C>T、NT16362T>C和NT16519T>C均可在实验组、自身对照组Ⅰ、自身对照组Ⅱ和正常对照组中观察到,无显著差异。NT249A-del、NT523A-del、NT524C-del和NT16129G>A的多态性变化可见于40%以上的肿瘤组织,未见于正常肝组织,且差异有统计学意义。结论:1.HBV感染与AFB1长期持续暴露是广西地区HCC高发的主要危险因素。HCC患者均处于较高水平的HBV暴露和(或)AFB1暴露。预防HBV暴露和AFB1暴露仍是HCC防治工作的首要任务。2.NT73A>G、NT150C>T、NT263A>G、NT310T>CTC(NT309Cins 和 NT311Cins)、NT489 T>C、NT16093T>C、NT16223C>T、NT16234C>T、NT16362T>C、NT16519T>C 可能属于广西地区特定单倍体人群mtDNA D-Loop区的核苷酸序列多态性。3.未发现HBV暴露和(或)AFB1暴露HCC在mtDNAD-Loop区中具有特殊的分子生物学指纹,也未发现HBV协同AFB1氧化应激损伤所致的核苷酸序列突变,但NT249 A-del、NT315-Cins/C-del、NT523 A-del、NT524 C-del、NT16129G>A 的单核苷酸多态性可能与HCC的发生有关。
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