论文部分内容阅读
半乳糖凝集素-1（Gal-1）表达于细胞胞质、细胞核、细胞内膜和外膜及细胞外基质。通过影响免疫细胞粘附、迁移、激活、信号转导、增生、分化和凋亡调节炎症过程。本研究中,我们主要针对于Gal-1在体外和体内对炎症反应的影响及其机制。1.Gal-1在金葡菌感染的巨噬细胞NF-κB炎症中的作用研究背景Gal-1在调节细胞炎症反应中发挥重要作用。目前研究发现在克氏锥虫感染巨噬细胞炎症模型中Gal-1发挥抗炎作用,但Gal-1在金黄色葡萄球菌（金葡菌）感染巨噬细胞NF-κB炎症中的抗炎作用尚未被证实。研究目的1.研究金葡菌感染巨噬细胞对Gal-1和NF-κB活化的影响2.探讨Gal-1在金葡菌介导的巨噬细胞NF-κB炎症活化中的作用研究方法1.金葡菌感染巨噬细胞活化Gal-1和NF-κB的检测金葡菌感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7 20 min、40 min、60 min、120 min。Western Blotting（WB）检测相关信号蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜（LSCM）观察GFP-p-P65表达水平。2.r Gal-1预处理金葡菌感染巨噬细胞诱导的NF-κB炎症的检测重组Gal-1（r Gal-1）预处理RAW264.7后,再给予金葡菌感染RAW264.7细胞60 min。WB检测相关炎症信号蛋白表达水平;LSCM观察GFP-p-P65表达水平;ELISA检测培养上清液中细胞分泌的IL-1β和TNF-α水平。3.si RNA干扰Galectin-1后金葡菌感染巨噬细胞诱导的NF-κB炎症的检测Gal-1 si RNA预处理RAW264.7后,金葡菌感染RAW264.7细胞60 min。WB检测相关炎症信号蛋白表达水平;LSCM观察GFP-p-P65表达水平;ELISA检测培养上清液中细胞分泌的IL-1β和TNF-α水平。4.r Gal-1和U0126预处理金葡菌感染巨噬细胞诱导的NF-κB炎症的检测r Gal-1和U0126预处理RAW264.7后,再给予金葡菌感染RAW264.7细胞60min。WB检测相关炎症信号蛋白表达水平;ELISA检测培养上清液中细胞分泌的IL-1β和TNF-α水平。研究结果1.金葡菌感染巨噬细胞增加了p ERK、p-P65和Gal-1的表达金葡菌感染RAW264.7后,细胞内p-ERK、p-P65和Gal-1表达水平显著升高,同时在感染60 min时,表达水平达到峰值,之后表达水平逐渐下降。同样地,LSCM观察GFP-pP65表达水平显著升高,在感染60 min时,表达水平达到峰值,之后表达水平逐渐下降。2.r Gal-1降低了金葡菌感染巨噬细胞激活的NF-κB炎症r Gal-1预处理RAW264.7细胞后,金葡菌感染细胞60 min。细胞内p-ERK水平显著升高,p-P65表达水平显著下降;LSCM观察GFP-p-P65表达水平显著下降;而且细胞上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平显著下降。3.Gal-1 si RNA增强了金葡菌感染巨噬细胞激活的NF-κB炎症Gal-1 si RNA预处理RAW264.7后,金葡菌感染细胞60 min。细胞内p-ERK表达水平显著下降,而p-P65表达水平显著增加;LSCM观察GFP-p-P65表达水平显著增加;而且细胞上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平显著升高。4.r Gal-1通过ERK信号通路降低了金葡菌感染巨噬细胞激活的NF-κB炎症与r Gal-1预处理组相比,同时给予U0126和r Gal-1预处理金葡菌感染的RAW264.7细胞显著增加了p-P65表达水平。进一步地,与给予r Gal-1处理相比,同时给予U0126和r Gal-1处理金葡菌感染的RAW264.7细胞显著增加了细胞上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平。研究结论1.金葡菌感染巨噬细胞增加了Gal-1表达和激活了NF-κB炎症2.Gal-1通过ERK信号通路降低了金葡菌感染巨噬细胞激活的NF-κB炎症2.Gal-1对小鼠过敏性气道炎症的影响及其机制研究研究背景支气管哮喘（简称哮喘）是由多种细胞以及细胞组分参与的气道炎症性疾病。据统计,中国哮喘患者约3000万。研究发现Gal-1在体内、体外具有抗炎作用。到目前为止,有应用重组Gal-1干预其他过敏性炎症疾病模型的研究,但干预过敏性气道炎症的研究未见报道。研究目的1.研究小鼠过敏性气道炎症模型中Gal-1表达水平情况2.探讨Gal-1在过敏性气道炎症中的作用及其机制研究方法1.建立小鼠过敏性气道炎症模型,检测肺组织中Gal-1表达水平腹腔内注射卵清白蛋白（OVA）致敏和雾化吸入OVA激发C57BL/6野生型小鼠建立急性过敏性气道炎症模型。RT-PCR检测肺组织中Gal-1 m RNA表达水平;免疫组织化学和WB检测肺组织中Gal-1表达水平;ELISA检测肺泡灌洗液（BALF）中Gal-1表达水平。2.r Gal-1处理后,检测过敏性气道炎症小鼠肺部炎症的相关指标r Gal-1处理后,H&E染色观察气道炎症水平,PAS染色气道杯状细胞增生和黏液分泌;瑞氏染色观察BALF中细胞分类及数目;ELISA检测BALF中IL-4和IL-5表达水平。3.r Gal-1处理后,检测过敏性气道炎症小鼠肺部嗜酸性粒细胞浸润和上皮细胞相关因子表达。r Gal-1处理后,PAS染色高倍镜下观察嗜酸性粒细胞肺部浸润;RT-PCR检测肺组织中eotaxin、EPX、IL-25、IL-33和TSLP m RNA表达水平;WB方法进一步检测肺组织中eotaxin、EPX和IL-25蛋白表达水平。4.r Gal-1处理后,检测过敏性气道炎症小鼠肺组织中MAPKs和p-P65表达水平r Gal-1处理后,WB检测肺组织中p-MAPKs（p-ERK、p-JNK和p-P38）和p-P65蛋白表达水平。5.r Gal-1处理后,检测过敏性气道炎症小鼠全身炎症指标r Gal-1处理后,ELISA检测血浆中抗OVA Ig E水平和IL-17水平。研究结果1.过敏性气道炎症小鼠肺组织中Gal-1表达水平上调与对照组小鼠相比,炎症小鼠肺组织中Gal-1 m RNA和蛋白表达水平显著升高,同时,BALF中的Gal-1表达水平也显著升高。2.r Gal-1减轻了小鼠过敏性气道炎症与炎症小鼠相比,r Gal-1治疗小鼠气道内炎症水平显著降低;气道杯状细胞增生程度显著缓解,黏液分泌水平显著减少;BALF中炎症细胞数目显著下降;BALF中炎症因子水平显著下降。3.r Gal-1降低了过敏性气道炎症小鼠肺部嗜酸性粒细胞浸润和IL-25表达。与炎症小鼠相比,r Gal-1治疗小鼠气道内嗜酸性粒细胞浸润水平显著降低;嗜酸性粒细胞相关m RNA和蛋白表达水平显著降低;虽然IL-33和TSLP m RNA和蛋白表达水平无显著变化,但是IL-25 m RNA和蛋白表达水平显著降低。4.r Gal-1增加了过敏性气道炎症小鼠肺组织中p-ERK表达水平,而降低了p-P65表达水平与炎症小鼠相比,r Gal-1治疗小鼠肺组织中p-JNK和p-38表达水平无显著变化,但p-ERK表达水平显著升高。进一步地,r Gal-1治疗小鼠肺组织中p-P65表达水平显著降低。5.r Gal-1降低了过敏性气道炎症小鼠血浆IL-17和抗OVA Ig E水平与炎症小鼠相比,r Gal-1治疗小鼠血浆中IL-17和抗OVA Ig E水平显著下降。研究结论1.过敏性气道炎症诱导了小鼠肺组织Gal-1表达。2.r Gal-1通过上调ERK信号减轻了小鼠过敏性气道炎症。