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目的肝细胞肝癌(HCC)是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,已成为亟待解决的公共健康问题。HCC转移和术后复发严重影响患者的疗效和生活质量,是导致HCC患者死亡的主要原因。因此,深入研究HCC转移的机制,筛选复发转移的关键诊治靶点尤为重要。miRNA在肝癌发生发展过程中发挥着重要作用,参与调控肝癌的侵袭和转移。本研究通过miRNA芯片发现miR-181a在高转移能力肝癌细胞Huh-7/M8中表达下调。miR-181a是一种多功能miRNA,既往的研究显示其对HCC转移的影响存在争议。进而通过数据库预测,找出miR-181a可能的下游靶基因HMGB2。HMGB2是高迁移率族蛋白家族的成员,已被报道参与调控胃癌、卵巢癌等肿瘤的转移,但暂无文献报道HMBG2参与调控HCC转移。目前也未有文献报道miR-181a与HMGB2的上下游调控关系。故此,本研究的目的在于探讨miR-181a对HCC转移的作用及介导HMGB2的具体分子机制,并分析miR-181a和HMGB2表达异常与HCC临床病理特征、预后的关系。方法首先,以Huh-7细胞为亲代,利用反复穿越Transwell小室的方法我们建立了新型肝癌高转移细胞模型Huh-7/M8。通过迁移、侵袭、划痕、尾静脉肺转移模型等实验比较亲代Huh-7与Huh-7/M8细胞体内外的转移能力。接着应用miRNA芯片与qRT-PCR验证找出调控HCC转移的潜在miRNA——miR-181a。通过慢病毒敲低与过表达实验研究miR-181a对HCC细胞体外转移能力的影响。然后,通过TargetScan、Mirdb、Mirtarbase三个权威数据库预测miR-181a可能的下游靶基因,在过表达miR-181a的Huh-7/M8细胞中,用qRT-PCR、Western免疫印迹验证找出下游靶基因HMGB2,并用双荧光素酶报告基因实验研究两者是否直接结合。利用常规敲低与过表达实验研究HMGB2对HCC体外细胞转移能力的影响,并通过体内外的拯救实验进一步证明miR-181a与HMGB2对HCC细胞体内外转移能力的影响及两者的上下游调控关系。同时,采用WB检测敲低或过表达miR-181a与HMGB2对HCC细胞EMT的影响。最后,利用原位杂交技术(90例)、免疫组织化学染色法(90例)、qRT-PCR(144例)检测接受根治性肝切除患者肝癌肿瘤组织与癌旁组织miR-181a、HMGB2 mRNA与蛋白的表达量,用统计学方法分析miR-181a和HMGB2表达异常与HCC患者临床病理特征、预后的关系。结果首先,与亲代Huh-7细胞相比,Huh-7/M8细胞体内外的转移能力均明显增强。miRNA芯片检测与qRT-PCR证明miR-181a在Huh-7/M8中表达量显著下调。进一步发现过表达miR-181a后,Huh-7/M8细胞体外迁移侵袭能力明显减弱;抑制miR-181a的表达后,Huh-7细胞体外迁移侵袭能力显著增强。然后,在数据库检索潜在的靶基因后用qRT-PCR与WB验证,发现Huh-7/M8细胞过表达miR-181a后HMGB2的mRNA与蛋白表达量均明显下降。双荧光素酶报告基因实验显示miR-181a可以直接结合HMGB2 mRNA的3’-UTR区域。进一步发现过表达HMGB2后,Huh-7细胞体外迁移侵袭能力明显增强;沉默HMGB2的表达后,Huh-7/M8细胞体外迁移侵袭能力显著减弱。拯救实验表明过表达miR-181a的Huh-7/M8细胞上调HMGB2的表达可以部分恢复体外的迁移侵袭能力;抑制miR-181a表达的Huh-7下调HMGB2的表达可以抑制其体外的迁移侵袭能力。体内实验显示Huh-7/M8过表达miR-181a后,肺转移结节数与大小显著降低;而在此基础上过表达HMGB2后,肺转移结节数与大小可明显升高。进一步的机制探索显示,过表达miR-181a或沉默HMGB2后,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下调;反之抑制miR-181a的表达或过表达HMGB2后,E-cadherin蛋白表达下调,Vimentin蛋白表达上调。最后,在肝细胞肝癌肝手术切除临床标本中,miR-181a在肝癌肿瘤组织中低表达;miR-181a表达量与血管侵犯密切相关,miR-181a低表达肝癌患者的总体生存期显著短于高表达组。HMGB2 mRNA与蛋白在肝癌肿瘤组织中均高表达;HMGB2蛋白表达量与年龄、血管侵犯、分化程度、AFP、肿瘤分级显著相关;HMGB2蛋白高表达患者的总体生存时间显著短于低表达组。miR-181a低表达并且HMGB2蛋白高表达的患者总体生存预后最差。结论与亲代Huh-7细胞相比,Huh-7/M8细胞在体内外均具有更强的迁移侵袭能力。miR-181a在高转移肝癌细胞Huh-7/M8中显著低表达。miR-181a可以直接结合下游靶基因HMGB2,通过抑制其介导的EMT信号通路减弱肝癌细胞体内外的转移能力。miR-181a在肝细胞肝癌中显著低表达,而HMGB2显著高表达,miR-181a低表达与HMGB2高表达和患者不良预后显著相关。miR-181a低表达并且HMGB2蛋白高表达的患者生存预后最差。本研究的结果表明miR-181a和HMGB2是肝癌复发转移的生物标志物和潜在的诊治靶点,为开发有效防治肝癌转移的新策略提供理论依据。