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目的:获得可以稳定表达hIL-12蛋白的小鼠乳腺癌细胞株EMT6/IL-12。通过对EMT6/IL-12荷瘤小鼠进行肿瘤生长观察及免疫指标检测,探讨其抗肿瘤作用及其机制。方法:将重组人IL-12真核表达载体pcDNA6/v5-his-p70(pcDNA-p70)转染入小鼠乳腺癌细胞EMT6,经筛选获得稳定转染克隆EMT6/IL-12,并进行表达鉴定。昆明小鼠随机分成三组,1组:EMT6/IL-12组,2组:pcDNA6-p70组,3组:EMT6组。于小鼠右胸皮下接种肿瘤细胞,1组接种EMT6/IL-12细胞,2、3组接种EMT6细胞。于接种肿瘤细胞后的第4、7、10、14、17天给予瘤内注射药物,1、3组注射生理盐水,2组注射pcDNA6-p70质粒。于第21天处死小鼠,剥取瘤体、脾脏和胸腺并称重;分别计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数。检测脾淋巴细胞杀伤活性;脾淋巴细胞增殖反应:血清IFN-γ水平;ConA刺激后的脾淋巴细胞CD4/IFN-γ,CD8/IFN-γ双标记阳性细胞的百分率。结果:EMT6/IL-12可以表达较高水平hIL-12蛋白。EMT6/IL-12组荷瘤小鼠抑瘤率(97.08%)较pcDNA6-p70(76.25%)及EMT6组提高(p<0.01):并且,EMT6/IL-12小鼠的脾及胸腺指数、脾淋巴细胞杀伤活性、脾淋巴细胞增生反应及血清IFN-γ水平均高于对照组(p<0.01);CFC检测显示,EMT6/IL-12组脾淋巴细胞CD4/IFN-γ(7.49±0.05%)、CD8/IFN-γ(6.35±0.06%)双标记阳性细胞的百分率均高于pcDNA6-p70(CD4/IFN-γ:4.3±0.03%;CD8/IFN-γ:3.7±0.05%)及EMT6组(CD4/IFN-γ:2.05±0.04%;CD8/IFN-γ:1.26±0.03%)(p<0.01)。结论:本研究成功地获得可高效稳定表达hIL-12的EMT6/IL-12细胞株;IL-12修饰的小鼠乳腺癌细胞EMT6/IL-12表现出预期抗肿瘤作用。