纤维素作为一种丰富的可再生资源，可通过酶降解的方法转化为易发酵的糖类，从而生产酒精或其他产品。纤维素酶是这一转化过程中的关键酶之一。为了获得一株纤维素酶的高效基因工程菌，本研究通过以下试验获得了如下结果： 1．应用刚果红染色鉴定和粗酶液活力测定相结合的筛选方法，从腐烂的纸浆中筛选到一株高活力碱性纤维素酶产生菌Bacillus sp．CY1-3。该菌为芽孢杆菌，适宜在pH6.2～8.8、温度34～46℃下生长。摇瓶发酵产酶的最适温度、pH分别为34～43℃、7.8～8.8，培养36h左右达到产酶高峰。酶反应的最适温度为60℃，pH为5.5～8，并具有良好的热稳定性和酸碱稳定性，Cu²⁺、Mn²⁺、Mg²⁺和Ca²⁺对酶活力具有促进作用，而Co²⁺和Zn²⁺表现明显的抑制作用。该菌产生单一的内切葡聚糖酶，在最佳条件下CMCase活力可达13.6U／mL。这种酶制剂洗涤剂在工业中具有良好的应用前景。 2．将菌株Bacillus sp．CY1-3基因组DNA用限制性内切酶Sau3AI部分消化，分离2～7kb的片段连接到用BamHI完全消化的克隆载体pBluSKM上，转化大肠杆菌DH_5α，构建其基因组DNA部分文库。应用刚果红染色检测酶活性的方法，从近10万个克隆子中筛选出出6个表现纤维素酶活性的阳性克隆子。限制性内切酶切分析，6个克隆子表现为一致的图谱，视其为相同克隆子。 3．Bacillus sp．CY1-3菌株纤维素酶基因克隆片段的序列分析表明：质粒pGJc-1上2189bp的插入片段中有一个由1593个核苷酸组成的开放阅读框，命名为celC。在其推测的起始密码子ATG的上游相隔5bp处有一个潜在的核糖体结合位点AGGAGT，该序列可使mRNA和细菌核糖体16S rRNA的3’端碱基互补配对。在ORF的上游64bp处发现了一个可能的启动子序列，即-35区的TAGACA和-10区为TATAAT，两者相隔18bp，该序列与大肠杆菌的σ⁷⁰所识别的保守的启动序列十分相似。 4．CelC蛋白分析表明，CelC由531个氨基酸残基组成，预计分子量大小为58，351道尔顿，等电点为10.18。将CelC蛋白氨基酸序列与GencBank中已公布的氨基酸序列对比分析，结果表明该蛋白与多种细菌的β-1，4-内切葡聚糖酶具有很高的同源性。通过NCBI的保守结构域检索，CelC有一个位于N端66～320AA之间，属于糖基水解酶家族5的催化结构域；一个位于C端391～472AA家族3碳水化合物结合组件。 5．将含纤维素酶基因的重组克隆载体pGJc-1进行亚克隆，用BamHI和SacI双酶