【摘 要】
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犬瘟热（Canine Distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一种多种属动物的高度接触性传染病,患病动物通常表现为双相热、胃肠道与呼吸道损害,严重的会发展至神经症状甚至死亡。CDV的感染对不同年龄不同种属动物的致死率不同,其中对未免疫疫苗的家养宠物幼犬致死率高达80%,对于家养犬科宠物如宠物犬、貂或经济动物雪貂,以及其他野生动物如大熊猫
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犬瘟热（Canine Distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一种多种属动物的高度接触性传染病,患病动物通常表现为双相热、胃肠道与呼吸道损害,严重的会发展至神经症状甚至死亡。CDV的感染对不同年龄不同种属动物的致死率不同,其中对未免疫疫苗的家养宠物幼犬致死率高达80%,对于家养犬科宠物如宠物犬、貂或经济动物雪貂,以及其他野生动物如大熊猫、虎等构成严重威胁。然而在实验研究中,了解CDV感染的方法主要依赖于细胞病变的观察,具有主观性的缺点。目前在国内市场上尚缺少一种直接免疫荧光的方法来鉴定细胞水平上CDV感染的方法,而向国外购买荧光抗体价格高昂。因此,本研究目的在于获得CDV N蛋白抗原,并制备单克隆抗体,为建立CDV的直接荧光免疫方法奠定基础。本研究利用引物通过RT-PCR的方法从CDV毒株中扩增N结构蛋白全长的目的片段,通过酶切连接的方法将其连接至原核表达载体质粒p ET-22b（+）构建了p ET-22b-CDVN原核表达质粒;经测序验证CDV N基因正确插入表达质粒且未发生突变后,利用适当浓度IPTG对其在大肠杆菌Rosetta（DE3）中诱导表达以获得N结构蛋白;大批量诱导所得融合蛋白N后经过蛋白纯化柱纯化及复性操作后,与弗式完全佐剂混合乳化后作为免疫原,免疫六周龄的雌性BALB/c小鼠,从小鼠脾脏收集活化的B淋巴细胞,与小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0体外融合,通过程序化的筛选以及亚克隆,获得稳定分泌抗CDV N蛋白为抗原的杂交瘤细胞株系CDVN-SP2/0。将CDVN-SP2/0体外培养扩增,计数后注射入经弗式不完全佐剂处理后七天的六周龄雌性BALB/c小鼠腹腔,小鼠腹部膨大后收获腹水,即为抗CDV N蛋白的单克隆抗体。本研究克隆了CDV的N基因,在大肠杆菌中表达获得了CDV N的结构蛋白,制备了抗该蛋白的单克隆抗体。该抗体的制备,有助于CDV病毒的检测方法的建立。
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胚胎着床和蜕膜化是早期妊娠小鼠子宫中两个极为重要的过程。抑瘤素M（Oncostatin M,OSM）属于白细胞介素6（IL-6）家族的一员。OSM与白血病抑制因子（LIF）信号有关并在第5天小鼠子宫中表达。但是OSM在早期妊娠小鼠子宫中的表达、定位、功能及调节仍然未知。原位杂交结果显示,Osm和Osmr（Osm特异性受体）主要在妊娠第1至4天小鼠子宫腔上皮和腺上皮表达,第5天主要在胚胎周围的基质中
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