目的:研究补阳还五汤及其有效部位（生物碱、苷）对凝血酶刺激的VEC表达血管活性物质和粘附分子的影响,探讨分子表达的信号转导途径,从内皮细胞环节揭示该方抗血栓形成的物质基础及作用机制。方法:体外培养ECV-304细胞,加入凝血酶（Thr）刺激,分组给予不同浓度补阳还五汤原方、生物碱、苷;MTT法测定OD值,观察细胞活力;比色法测定LDH活性,观察细胞损伤程度;重氮化反应法测定NO含量,分光光度法检测TNOS、iNOS（NOS₂）、eNOS（NOS₃）的活性;放免法测定ET-1、RT-PCR法检测ECE mRNA;放免法测定6-酮-PGF_1α,RT-PCR法检测PGI₂合成酶mRNA;免疫细胞化学法检测细胞粘附分子PECAM-1（CD31）、ICAM-1（CD54）、E-selectin的表达;免疫细胞化学法观察细胞PKCα的表达。体外培养ECV-304细胞,分组给予Thr、Thr+H₇、PMA、PMA+H₇、Thr+CATG、Thr+原方、Thr+生物碱、Thr+苷,观察细胞PKCα、p38、NF-κB和ERK表达的差异。结果:①凝血酶可显著降低ECV-304细胞代谢活力,增加细胞的通透性（P＜0.05）,而补阳还五汤原方和有效部位生物碱和苷对凝血酶诱导的内皮细胞活力下降和LDH漏出增加无显著影响（P＞0.05）。②凝血酶下调内皮细胞NO的分泌,降低eNOS的活性（P＜0.05）;补阳还五汤原方在100mg/ml时可使内皮细胞NO分泌显著增加,在50mg/ml浓度时也可抑制凝血酶诱导的NO分泌的减少（P＜0.05）,生物碱和苷对此无抑制作用（P＞0.05）。③补阳还五汤原方在100mg/ml浓度时可促进内皮细胞PGI₂合成酶mRNA的表达（P＜0.05）和PGI₂的释放,生物碱可促进PGI₂的释放（P＜0.01）。④补阳还五汤原方和生物碱、苷对凝血酶诱导的内皮细胞ET-1分泌增加无抑制作用（P＞0.05）,且原方在25mg/ml、100mg/ml两种浓度时,还可使ET-1的分泌显著增加（P＜0.05）;凝血酶刺激ECV-304后对内皮素转化酶（ECE）mRNA的表达无显著影响（P＞0.05）,补阳还五汤及生物碱、苷对ECE mRNA表达也无显著影响（P＞0.05）。⑤凝血酶刺激后内皮细胞表达粘附分子PECAM-1、ICAM-1和E-selectin的灰度值降低（P＜0.05）,提示三种粘附分子表达增强;与凝血酶组比较,补阳还五汤原方组这三种粘附分子表达的灰度值均增高（P＜0.05）,生物碱和苷组PECAM-1、ICAM-1表达的灰度值增高（P＜0.05）,但对于E-选择素的表达无显著影响。⑥凝血酶可促进内皮细胞PKCα的表达（P＜0.01）,而高、中剂量的原方、高剂量的生物碱和三种剂量的苷均可显著抑制PKCα的表达（P＜0.01～P＜0.05）。⑦凝血酶刺激后ECV-304细胞磷酸化p38MAPK及磷酸化ERK表达无变化（P＞0.05）,补阳还五汤原方及有效部位生物碱和苷对磷酸化p38MAPK及磷酸化ERK的表达亦无显著影响（P＞0.05）。⑧凝血酶刺激后ECV-304细胞NF-κB的表达无显著变化（P＞0.05）,补阳还五汤原方及其有效部位亦元显著影响（P＞0.05）。结论:补阳还五汤可促使内皮细胞分泌舒张血管物质NO和PGI₂,对缩血管物质ET-1的分泌无显著影响;补阳还五汤可下调内皮细胞粘附分子的表达,生物碱和苷可能是方中产生该作用的物质。对其机制研究表明,凝血酶激活血管内皮细胞的作用主要是通过PKC活化而介导的,p38MAPK、ERK、NF-κB信号通路并不是凝血酶活化血管内皮细胞的主要信号途径,补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷可能通过抑制凝血酶激活PKC信号途径而发挥其抗凝血酶活化血管内皮细胞的作用。