【摘 要】
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目的:探索淫羊藿苷（Icariin,ICA）通过调控Pim-1基因抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的作用和机制。方法:1.通过CCK-8增殖实验检测ICA对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖能力的影响,确定后续实验药物使用浓度;2.通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测ICA影响下乳腺癌细胞MDA-MB-231中Pim-1的m RNA和
【基金项目】
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项目名称：淫羊藿苷Notch通路调控大鼠ASCs促进超长随意皮瓣存活的机制研究，项目合同编号:81860341，项目来源:国家自然科学基金；
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目的:探索淫羊藿苷（Icariin,ICA）通过调控Pim-1基因抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的作用和机制。方法:1.通过CCK-8增殖实验检测ICA对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖能力的影响,确定后续实验药物使用浓度;2.通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测ICA影响下乳腺癌细胞MDA-MB-231中Pim-1的m RNA和蛋白表达水平;3.通过重组慢病毒载体转染MDA-MB-231细胞使其过表达Pim-1,通过荧光法和Western blot验证转染效率,获取稳定转染细胞株;4.将实验分为3组:空白对照组（Ctrl组）、淫羊藿苷组（ICA组）和拮抗组（Pim1+ICA组）。通过Transwell迁移及侵袭实验、划痕实验、细胞凋亡实验和Western blot检测异位过表达Pim-1对ICA抑制MDA-MB-231细胞效应的拮抗作用;5.将实验分为4组:空白对照组（Ctrl组）、淫羊藿苷组（ICA组）、过表达组（Pim1组）和拮抗组（Pim1+ICA组）。通过裸鼠荷瘤实验检测异位过表达Pim-1对ICA抑制MDA-MB-231细胞效应的拮抗作用。结果:1.CCK-8实验结果显示,ICA对MDA-MB-231细胞生长有明显抑制,随着浓度增加,药物抑制细胞增殖的能力越强。最佳刺激浓度为75μM。2.q RT-PCR和Western blot结果显示,随着ICA浓度增加,Pim-1在MDAMB-231细胞中的m RNA和蛋白表达均呈下降趋势。3.荧光细胞比例≥90%。Western blot结果显示,过表达组Pim-1蛋白相对表达量高于阴性对照组和空白对照组（P＜0.05）。4.Transwell细胞迁移及侵袭实验表明,Ctrl组（183±9.54,93±10.44）和Pim1+ICA组（142±20.42,65±10.41）穿膜细胞高于ICA组（48±4.16,23±9.61）,差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞划痕实验表明,Ctrl组（0.6201±0.50）与Pim1+ICA（0.5286±0.06）愈合率明显高于ICA组（0.3140±0.04）,差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞凋亡实验表明,Ctrl组（4.340±3.24）和Pim1+ICA组（12.563±6.79）细胞凋亡率明显高于ICA组（30.610±6.26）,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blot显示ICA组Bcl-2（0.624±0.04）、PCNA（0.518±0.16）、Vimentin（0.549±0.17）蛋白相对表达量较Ctrl组和Pim1+ICA组（0.844±0.03,0.871±0.122,1.011±0.14）降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,与E-cadherin蛋白相对表达量相反（ICA组1.975±0.28,Pim1+ICA组1.185±0.167）,差异有统计学意义（P＜0.05）。5.Ctrl组和Pim-1组移植瘤生长速率明显高于ICA组和Pim1+ICA组（P＜0.05）,Pim1+ICA组与ICA组的生长速率差异无统计学意义。Ctrl组和Pim-1组移植瘤平均重量明显大于ICA组和Pim1+ICA组（P＜0.05）,Pim1+ICA组肿瘤平均重量明显大于ICA组（P＜0.05）,Ctrl组和Pim-1组之间差异无统计学意义（P=0.627）。结论:通过体外和体内实验证明,淫羊藿苷具有促进MDA-MB-231细胞凋亡,抑制MDA-MB-231细胞的上皮间质化进程的作用,其作用机制可能是抑制Pim-1的表达。
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