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【背景】结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)作为我国发病率排名第五位,死亡率排名第五位的常见的消化道恶性肿瘤对人类健康的威胁仍然处于逐年上升的趋势。由于当前检查手段的局限,多数患者确诊结直肠癌时已处于中晚期,这直接影响了结直肠癌患者的生存预后。因此,寻找并发现结直肠癌中新的早期诊断标记物以及治疗靶标对于改善患者生存预后具有重大的临床意义。【目的】本实验旨在探索GPR56在结直肠癌中的表达水平和下调结直肠癌细胞中GPR56基因表达量对结直肠癌细胞株增殖,侵袭,迁移的影响及可能的相关机制。【方法】1.用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了结直肠癌组织及其对应正常组织中的GPR56的表达量,同时分析其与临床资料的相关性;qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GPR56在肠癌细胞和人正常肠上皮细胞中的mRNA和蛋白的表达水平。2.用CCK-8检测敲低GPR56后结直肠癌细胞株增殖能力变化;采用流式细胞术检测GPR56表达下调对于细胞周期分布和凋亡率的影响。通过Western blot实验检测GPR56表达下调后周期及凋亡相关蛋白的变化情况。3.划痕实验和Transwell实验观察GPR56下调后对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。4.通过Western blot实验检测GPR56下调后EMT和PI3K-AKT特征蛋白的表达情况。引入PI3K-AKT特异性通路抑制剂LY294002后,通过Transwell实验观察正常对照组、GPR56过表达组、GPR56过表达后抑制PI3K-AKT组和单纯抑制PI3K-AKT组之间细胞侵袭能力的变化。5.通过Western blot实验检测正常对照组、GPR56过表达组、GPR56过表达后抑制PI3K-AKT组之间EMT相关蛋白的表达情况【结果】1.GPR56在结直肠癌组织和肠癌细胞中相对于正常对比项为高表达,且GPR56的表达量与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤浸润深度和远处转移相关。2.下调GPR56表达量显著降低肠癌细胞株的增殖能力;促使S期细胞的数目减少,促进癌细胞的凋亡。3.干扰GPR56后,结直肠癌细胞株迁移和侵袭能力出现了减弱。4.下调GPR56表达量的结直肠癌细胞株E-cadherin的表达量增加,N-cadherin和Vimentin的表达量减少;磷酸化的PI3K和磷酸化的AKT的表达量明显下降。过表达GPR56结直肠癌细胞株的迁移能力显著增强,然而加入PI3K-AKT通路抑制剂LY294002后,细胞迁移能力明显减弱。5.过表达GPR56表达量的结直肠癌细胞株E-cadherin的表达量减少,N-cadherin和Vimentin的表达量增加;而加入PI3K-AKT通路抑制剂LY294002后E-cadherin的表达量增加,N-cadherin和Vimentin的表达量减少。【结论】GPR56在结直肠癌组织和细胞水平相对于正常对比项均为高表达,并与肿瘤分期、淋巴结转移、远处转移密切相关,降低GPR56表达水平可以减弱结直肠癌细胞增殖和转移能力。GPR56可能通过EMT和PI3K/AKT通路来促进癌细胞转移。GPR56有望从基础科研及临床治疗两个方面为攻克结直肠癌提供全新的技术理念。