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压力性尿失禁(Stress Urinary Incontinence,SUI)是常见的老年性疾病,几乎所有的下尿路症状及许多阴道症状都可见于压力性尿失禁.1977年,国际尿控协会(International Continence Society,ICS)给SUI下了一个定义:膀胱内压超过最大尿道压时,在缺乏逼尿肌收缩的情况下,所出现的社会学和卫生学不能接受的不自觉漏尿,并影响患者的生活.腹压增加下的漏尿是最典型的症状,而尿急、尿频,急迫尿失禁和排尿后胀满感亦是常见的症状.SUI常同时合并生殖器官的膨出和脱垂.50～65岁的妇女25﹪患有尿失禁,而且随着年龄的增长发病率还会相应的增加.SUI占整个尿失禁发病率的50﹪以上,其实际发病率比临床统计数值更高.由于其症状的特殊性常会给老年妇女带来巨大生理和心理上的痛苦,并造成严重的社会经济负担.绝经后SUI和盆腔器官脱垂(Pelvic Organ Prolapse,POP)的发生率明显增高,提示SUI及POP的发生与雌激素缺乏有关,雌激素对靶器官的作用是通过雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)完成的.近年研究提示,女性SUI患者盆底支持组织胶原蛋白(Collagen)含量显著减少,而胶原蛋白I(Collagen I)和胶原蛋白Ⅲ(Collagen Ⅲ)是胶原蛋白家族中起支持和弹性作用的主要成分,可能是由于它们的减少导致盆底支持组织弹性减弱,出现盆底松弛,进而导致SUI的产生.而转化生长因子一β<,1>(Transforming Growth Factor,TGF-β<,1> )的一个重要的生物学作用是调节胶原合成,能增加以胶原为主的间质蛋白质的合成,在组织器官纤维化形成过程中起作用.
为研究SUI的发生机制了解盆底起支持作用的结缔组织中胶原蛋白的改变,以及引起这种胶原蛋白改变的原因,同时,观察盆底结缔组织中雌激素受体的改变,探讨它们在绝经后SUI发生、发展中的关系,我们利用免疫组化的方法观察ER、TGF-β1、CollagenⅠ、Ⅲ在绝经后SUI患者阴道前壁组织中的表达,为绝经后妇女SUI的治疗提供方法和思路.
材料与方法；1.研究对象选取2005年10月～2006年5月郑州大学第三附属医院妇产科收治的绝经后SU工患者30例(SUI组)、盆腔器官脱垂的患者28例(POP组);并选择同期非卵巢功能性肿瘤及宫颈上皮内瘤变患者30例作为正常对照观察(正常组),所选患者SUI、POP组均为绝经后妇女,正常组为围绝经期妇女.SUI入选条件:符合SUI诊断标准;近3个月内未服用过激素类药物.POP入选条件:自诉无尿失禁症状,经指压试验,棉签试验及尿动力检查证实无尿失禁;妇科检查均有中度以上阴道前壁膨出;近个月内未服用激素类药物.正常组入选条件:无尿失禁症状;妇科检查无阴道壁膨出或子宫脱垂,近3个月内未服过用激素类药物;术后病理检查证实为非子宫内膜异位症等雌激素相关疾病.
正常组和POP组采用阴式子宫切除术和开腹子宫切除术;SUI组采用经阴道无张力尿道中段悬吊(tension-free vagina tape,TVT)术或BlJrch手术.术中提取患者阴道前壁12点处组织.取下的组织立即放入加有中性缓冲液的10﹪的甲醛溶液中固定24h,之后用石蜡包埋标本,切片厚度为3μm.部分组织切片行HE染色,以明确组织学结构.2.方法采用免疫组化方法处理切片.经微波处理后,采用SP法,ER、TGF β.和CollagenⅠ、Ⅲ抗体及SP试剂盒均购自北京中杉公司,同时设对照组.切片常规脱蜡水化,0.3﹪H<,2>O,阻断内源性过氧化物酶,非免疫性羊血清封闭,依次加一抗、二抗及链霉素一过氧化物酶,DAB显色,苏木素复染,透明封片.用PBS液代替一抗、二抗作阴性对照.对每张切片高倍镜下观察计数细胞核ER染色阳性的细胞数(因ER阳性细胞少,均以同种细胞中ER阳性率表示ER染色情况).经ER染色,细胞核显示棕黄色为ER阳性.以乳腺癌作为阳性对照,磷酸盐缓冲液代替ER单克隆抗体作为阴性对照.转化生长因子TGF-β<,1>阳性着色呈棕黄色主要位于胞浆,部分定位于胞膜,以每一组切片中阳性细胞所占的百分比为:阴性(-),阳性细胞≤10﹪:弱阳性(+),阳性细胞11﹪～30﹪:阳性(++),阳性细胞31﹪～70﹪,强阳性(+++),阳性细胞71﹪～100﹪.TGF-β<,1>表达的阳性率按每组(+)～(+++)的标本总数除以每组的总标本数来计算.CollagenⅠ、Ⅲ则以其阳性表达的辉度值作为比较对象进行比较.
3.统计学处理所有数据采用SPSS12.0统计软件包进行处理,两组均数间比较采用t检验;各组间的均数比较用单因素方差分析;样本率的比较用卡方检验;相关分析采用Pearson相关分析.各检验方法均以α=0.05为检验显著性水准.
结果
1.ER的表达3 组患者阴道前壁组织中,ER阳性率均不高,在SUI组、POP组及正常组分别为1.66﹪、1.83﹪、2.64﹪.SUI组与正常组比较,差异有极显著性(p<0.05);POP组与正常组比较,差异有极显著性(p<0.05);SUI组与POP组比较,差异无显著性(p<0.05).
2.TGF-β<,1>表达SUI组、POP组及正常组患者阴道前壁组织中,TGF-β<,1>表达阳性率分别为20.00﹪、14.30﹪、93.33﹪,SUI组与对照组比较,差异有极显著性(p<0.05);POP组与正常组比较,差异有极显著性(p<0.05):SUI组与POP组比较,差异无显著性(p>0.05).
3.Collagen Ⅰ、Ⅲ的表达3 组患者阴道前壁组织中Collagen Ⅰ含量的表达以辉度值为标准,在SUI组、POP组及正常组分别为98.62±0.28、98.15±O.40和100.03±0.27.SUI组与正常组比较,差异有极显著性(p<0.05);POP组与正常组比较,差异有极显著性(p<0.05);SUI组与POP组比较,差异无显著性(p>0.05).3组患者阴道前壁组织中Collagen Ⅲ含量的表达以灰度值为标准,在SUI组、POP组及正常组分别为98.46±0.35、98.23±0.18和100.12±O.43.SUI组与正常组比较,差异有极显著性(p<0.05);POP组与正常组比较,差异有极显著性(p<0.05);SUI组与POP组比较,差异无显著性(p>0.05).
4.ER与Collagen Ⅰ、Ⅲ的相关性ER与Collagen I间相关系数r=0.226,t=2.15,/p=0.034,故p<0.05,ER与Collagen Ⅰ间呈正相关.ER与Collagen Ⅲ间相关系数r=0.265,t=2.55,p=0.013,故p<0.05,ER与Collagen Ⅲ间呈正相关.
结论；1、绝经后SUI患者阴道前壁组织中的ER水平低下,导致阴道前壁退行性病变,对尿道的支持力减弱,尿道闭合压降低,可能通过此机制参与SUI的发生.
2、绝经后SUI患者阴道前壁组织中的TGF-β<,1>减少,导致阴道前壁组织中以胶原为主的间质蛋白减少,对尿道的支持力减弱,无法维持正常尿道闭合压,可能通过此机制参与SUI的发生.
3、绝经后SUI患者阴道前壁组织中的Collagen Ⅰ、Ⅲ含量水平低下,直接导致了其对尿道的支撑作用的减弱,影响了正常的尿道闭合压,可能通过此机制参与SU工的发生SUI的发生.