10种致病军团菌检测基因芯片的研制

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军团菌是引起军团病的病原菌,军团病的主要危害在于致死率高并且发病初期不易察觉。引起军团病的致病军团菌有数十种,其中最常见病原体为嗜肺军团菌,其次是米氏军团菌,再次是博滋曼军团菌和杜莫夫军团菌,还有其它类型致病军团菌的报道。军团病感染多是由冷热水管道包括空调,工业用水系统等产生的包含有军团菌的溶胶颗粒与人类接触引起。   目前随着空调,供水系统,加湿器等设备在社会生活中的广泛使用,军团病病例的发生在当代越发的频繁。因此,采取快速有效的致病军团菌鉴定手段成为当务之急。目前常见的鉴定手段主要有标本培养观察,抗体检测,生化手段检测等,但都存在着准确性差,周期长等缺点。本研究的目的就是通过利用军团菌16S-23S间区(ITS)序列的特异性并结合基因芯片的手段建立一种快速、高效、准确的鉴定方法。   本研究针对10种常见致病军团菌包括嗜肺军团菌,安氏军团菌,博滋曼军团菌,杜莫夫军团菌,费菲军团菌,戈尔曼军团菌,乔丹河军团菌,长滩军团菌,米氏军团菌,迈氏军团菌的ITS序列,设计了29条特异性探针,并以ITS序列设计正对照探针,共计30条探针。之后点制芯片,PCR条件优化,杂交液的选择,杂交温度的优化,最后进行芯片特异性实验,盲测,灵敏度评价,模拟样品实验和实际样品实验,最终确立了一种针对10种常见致病军团菌的快速,有效的检测手段,为以后该芯片在实际生活中的广泛使用奠定了基础。  
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