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【中图分类号】R693 【文献标识码】A 【文章编号】1550-1868（2015）03
【摘要】目的：研究雷帕霉素对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中骨形态发生蛋白-7（BMP-7）或结缔组织生长因子（CTGF）表达影响程度。方法：本文选择54只雄性Wistar大鼠，将其分为三组，分别为假手术组、UUO模型组以及雷帕霉素组，通过免疫组化半定量方法对肾组织中BMP-7或CTGF表达水平进行检测。结果：UUO模型组以及雷帕霉素组的大鼠在术后三天即出现BMP-7或CTGF表达的情况，最高值位于术后第14天；但两组BMP-7或CTGF表达均比UUO模型组低。结论：雷帕霉素能够降低UUO大鼠肾组织中BMP-7或CTGF的表达，这可能与雷帕霉素能够对抗肾间质纤维化的机制有一定关系。
【关键词】雷帕霉素； UUO大鼠； 肾组织； BMP-7； CTGF； 影响程度；
肾间质纤维化（RIF）是将各种肾脏疾病的病程进展加快到终末期肾病（ESRD）的共同途径。骨形态发生蛋白-7（BMP-7）和结缔组织生长因子（CTGF）是通过与受体结合，激活细胞内的smad信号传导系统，对软骨生长、骨生长以及细胞增殖分裂等现象产生调控作用[1]。近几年研究发现，BMP-7和CTGF在抗肾间质纤维化中也具有一定的作用，能够很好的对肾脏因子进行保护。雷帕霉素属于一种免疫抑制剂，研究发现雷帕霉素能够有效抑制单肾切除所引起的残余肾脏肥大，通过运用雷帕霉素实施干预治疗，观察UUO大鼠肾脏组织中BMP-7或CTGF的表达情况[2]。本文选择54只雄性Wistar大鼠，对其进行比较分析，报告如下。
1资料与方法
1.1动物造模以及分组 本文选择54只雄性Wistar大鼠，周玲在4～6周，体重在200g±20g，均为清洁级，将其均分为3组，组1为假手术组，组2为UUO模型组，组3为雷帕霉素组。2、3组所选的大鼠实施单侧输尿管梗阻造模术，具体操作为在腹正中线做一切口，开腹后找到左侧的肾脏以及输尿管，运用松紧适当的力度将近肾盂段结扎，逐层缝合腹壁切口；1组的大鼠开腹后不对输尿管进行结扎，直接将切口缝合。完成操作的24h后，开始对第3组大鼠实施药物灌胃，同时对1、2组大鼠实施生理盐水灌胃。
1.2样本留取和检测 分别在三组大鼠造模完成后的四个时间点进行观察，分别为第3、7、14、21d，从每组中随机抽取4只研究鼠，根据步骤采集标本。①在需要进行观察的前一天，将试验鼠放在代谢观察笼子内，对其进行禁食不禁水的操作，对其24h产生的尿液进行收集，对尿蛋白的含量进行测定，实施麻醉时相腹腔注射5%水合氯醛，对心脏实施穿刺操作后将血液取出，留置血清，通过全自动生化分析仪测定24h内大鼠尿蛋白含量以及血肌酐水平。②将血液标本采集完成后实施颈椎脱臼的方法处死试验鼠，留取梗阻一侧的肾脏标本，从中间切开，运用4%多聚甲醛将其固定，实施浸蜡、脱水以及石蜡包埋等操作，切片的厚度控制在3um作用，分别用，asson染色和HE染色。③免疫组化检测肾组织中BMP-7和CTGF的表达 所得切片进行脱蜡运用H2O2处理以灭活内源性酶，运用热修复抗原后运用5%BSA进行封闭液处理，适当进行稀释。每次染色后用PBS取代一抗作为阴性对照。用Laserpix图像分析系统实施图像分析。
1.3统计学方法 进行统计学分析时运用SPSS14.0系统软件，用均数±标准差表示计量资料，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
通过对本文所选的三组实验室进行研究，UUO模型组以及雷帕霉素组的大鼠在术后三天即出现BMP-7或CTGF表达的情况，最高值位于术后第14天；但两组BMP-7或CTGF表达均比UUO模型组低。
3讨论
肾间质纤维化（RIF）各种肾脏疾病的病程进展加快到终末期肾病（ESRD）的共同途径，引起病变的机制相对复杂，有多种细胞因素会在这个过程中出现。UUO模式是大部分研究人员认可的一种相对成熟的对肾小管间质纤维化进行研究的动物实验模型。随着疾病的不断发展，将输尿管结扎后，间质纤维化的情况逐渐的严重，甚至使得整个肾脏出现弥漫性损害，本文研究结论与此基本一致[3]。
结缔组织生长因子（CTGF）是CCN蛋白家族中的一个重要成員，是新的生长因素，能够加快分泌胶原以及纤维细胞增殖，能够表达与成人的肺、脑、皮肤、心脏以及肝肾等不同的器官组织，尤其是在肾脏中表达的最好，约为脑中含量的30倍[4]。现今学者研究指出CTGF基因为即刻早期基因，启动子中含有转化生长因素的β应答元件，会受到TGF-β1选择性的诱导激活，而且还具有为其下游介质存在调节细胞分裂增殖，导致细胞浸润和迁移，促进胶原合成和ECM分泌，可导致组织器官纤维化。
骨形态发生蛋白-7（BMP-7）为TGF-β超家族，现今已经得到30多个成员的结构，一般成熟的BMP-7是一个分子量约为35kDa的同源二聚体糖蛋白，组成结构为两条含有139个氨基酸的多肽链，通过在103位上的半胱氨酸通过二硫键连接而成。最近几年， BMP-7已经成为临床研究的热点问题，也是学者公认的一个对肾间质纤维化产生抑制的细胞因子，能够对肾脏产生保护作用[5]。
通过对本文所选的三组实验室进行研究，UUO模型组以及雷帕霉素组的大鼠在术后三天即出现BMP-7或CTGF表达的情况，最高值位于术后第14天；但两组BMP-7或CTGF表达均比UUO模型组低。
综上所述，雷帕霉素能够降低UUO大鼠肾组织中BMP-7或CTGF的表达，这可能与雷帕霉素能够对抗肾间质纤维化的机制有一定关系。
参考文献
[1]王亮亮，刘培娜，马继伟，等.积雪草颗粒对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞BMP-7表达的影响[J].山东医药.2009，24（46）：845-846.
[2]赵班，李慧凛，连耀国，等.MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系[J].北京医学.2009，12（03）：140-142.
[3]张铖，李梦，李凤婷，等.加味消渴康对糖尿病肾病大鼠丝裂原活化蛋白激酶P38及转化生长因子-β1表达的影响[J].中医学报.2012，36（12）：610-612.
【摘要】目的：研究雷帕霉素对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中骨形态发生蛋白-7（BMP-7）或结缔组织生长因子（CTGF）表达影响程度。方法：本文选择54只雄性Wistar大鼠，将其分为三组，分别为假手术组、UUO模型组以及雷帕霉素组，通过免疫组化半定量方法对肾组织中BMP-7或CTGF表达水平进行检测。结果：UUO模型组以及雷帕霉素组的大鼠在术后三天即出现BMP-7或CTGF表达的情况，最高值位于术后第14天；但两组BMP-7或CTGF表达均比UUO模型组低。结论：雷帕霉素能够降低UUO大鼠肾组织中BMP-7或CTGF的表达，这可能与雷帕霉素能够对抗肾间质纤维化的机制有一定关系。
【关键词】雷帕霉素； UUO大鼠； 肾组织； BMP-7； CTGF； 影响程度；
肾间质纤维化（RIF）是将各种肾脏疾病的病程进展加快到终末期肾病（ESRD）的共同途径。骨形态发生蛋白-7（BMP-7）和结缔组织生长因子（CTGF）是通过与受体结合，激活细胞内的smad信号传导系统，对软骨生长、骨生长以及细胞增殖分裂等现象产生调控作用[1]。近几年研究发现，BMP-7和CTGF在抗肾间质纤维化中也具有一定的作用，能够很好的对肾脏因子进行保护。雷帕霉素属于一种免疫抑制剂，研究发现雷帕霉素能够有效抑制单肾切除所引起的残余肾脏肥大，通过运用雷帕霉素实施干预治疗，观察UUO大鼠肾脏组织中BMP-7或CTGF的表达情况[2]。本文选择54只雄性Wistar大鼠，对其进行比较分析，报告如下。
1资料与方法
1.1动物造模以及分组 本文选择54只雄性Wistar大鼠，周玲在4～6周，体重在200g±20g，均为清洁级，将其均分为3组，组1为假手术组，组2为UUO模型组，组3为雷帕霉素组。2、3组所选的大鼠实施单侧输尿管梗阻造模术，具体操作为在腹正中线做一切口，开腹后找到左侧的肾脏以及输尿管，运用松紧适当的力度将近肾盂段结扎，逐层缝合腹壁切口；1组的大鼠开腹后不对输尿管进行结扎，直接将切口缝合。完成操作的24h后，开始对第3组大鼠实施药物灌胃，同时对1、2组大鼠实施生理盐水灌胃。
1.2样本留取和检测 分别在三组大鼠造模完成后的四个时间点进行观察，分别为第3、7、14、21d，从每组中随机抽取4只研究鼠，根据步骤采集标本。①在需要进行观察的前一天，将试验鼠放在代谢观察笼子内，对其进行禁食不禁水的操作，对其24h产生的尿液进行收集，对尿蛋白的含量进行测定，实施麻醉时相腹腔注射5%水合氯醛，对心脏实施穿刺操作后将血液取出，留置血清，通过全自动生化分析仪测定24h内大鼠尿蛋白含量以及血肌酐水平。②将血液标本采集完成后实施颈椎脱臼的方法处死试验鼠，留取梗阻一侧的肾脏标本，从中间切开，运用4%多聚甲醛将其固定，实施浸蜡、脱水以及石蜡包埋等操作，切片的厚度控制在3um作用，分别用，asson染色和HE染色。③免疫组化检测肾组织中BMP-7和CTGF的表达 所得切片进行脱蜡运用H2O2处理以灭活内源性酶，运用热修复抗原后运用5%BSA进行封闭液处理，适当进行稀释。每次染色后用PBS取代一抗作为阴性对照。用Laserpix图像分析系统实施图像分析。
1.3统计学方法 进行统计学分析时运用SPSS14.0系统软件，用均数±标准差表示计量资料，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
通过对本文所选的三组实验室进行研究，UUO模型组以及雷帕霉素组的大鼠在术后三天即出现BMP-7或CTGF表达的情况，最高值位于术后第14天；但两组BMP-7或CTGF表达均比UUO模型组低。
3讨论
肾间质纤维化（RIF）各种肾脏疾病的病程进展加快到终末期肾病（ESRD）的共同途径，引起病变的机制相对复杂，有多种细胞因素会在这个过程中出现。UUO模式是大部分研究人员认可的一种相对成熟的对肾小管间质纤维化进行研究的动物实验模型。随着疾病的不断发展，将输尿管结扎后，间质纤维化的情况逐渐的严重，甚至使得整个肾脏出现弥漫性损害，本文研究结论与此基本一致[3]。
结缔组织生长因子（CTGF）是CCN蛋白家族中的一个重要成員，是新的生长因素，能够加快分泌胶原以及纤维细胞增殖，能够表达与成人的肺、脑、皮肤、心脏以及肝肾等不同的器官组织，尤其是在肾脏中表达的最好，约为脑中含量的30倍[4]。现今学者研究指出CTGF基因为即刻早期基因，启动子中含有转化生长因素的β应答元件，会受到TGF-β1选择性的诱导激活，而且还具有为其下游介质存在调节细胞分裂增殖，导致细胞浸润和迁移，促进胶原合成和ECM分泌，可导致组织器官纤维化。
骨形态发生蛋白-7（BMP-7）为TGF-β超家族，现今已经得到30多个成员的结构，一般成熟的BMP-7是一个分子量约为35kDa的同源二聚体糖蛋白，组成结构为两条含有139个氨基酸的多肽链，通过在103位上的半胱氨酸通过二硫键连接而成。最近几年， BMP-7已经成为临床研究的热点问题，也是学者公认的一个对肾间质纤维化产生抑制的细胞因子，能够对肾脏产生保护作用[5]。
通过对本文所选的三组实验室进行研究，UUO模型组以及雷帕霉素组的大鼠在术后三天即出现BMP-7或CTGF表达的情况，最高值位于术后第14天；但两组BMP-7或CTGF表达均比UUO模型组低。
综上所述，雷帕霉素能够降低UUO大鼠肾组织中BMP-7或CTGF的表达，这可能与雷帕霉素能够对抗肾间质纤维化的机制有一定关系。
参考文献
[1]王亮亮，刘培娜，马继伟，等.积雪草颗粒对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞BMP-7表达的影响[J].山东医药.2009，24（46）：845-846.
[2]赵班，李慧凛，连耀国，等.MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系[J].北京医学.2009，12（03）：140-142.
[3]张铖，李梦，李凤婷，等.加味消渴康对糖尿病肾病大鼠丝裂原活化蛋白激酶P38及转化生长因子-β1表达的影响[J].中医学报.2012，36（12）：610-612.