目的：龟甲在体外可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化，但是其机制未明。本研究探讨龟甲水提液调控核转录因子-κB（NF-κB）炎症微环境促小鼠前成骨细胞系（MC3T3-E1）成骨分化的作用及机制。方法：体外培养MC3T3-E1细胞，并进行成骨诱导，龟甲水提液干预。实验分为：空白组、成骨诱导组、龟甲水提液(20 mg·L^-1)联合成骨诱导组。细胞增殖毒性检测试剂盒（CCK-8）法检测MC3T3-E1增殖能力，并确定最佳干预浓度；碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红（ARS）染色检测MC3T3-E1成骨分化能力；实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测NF-κB p65，NF-κB p105，白细胞介素-6（IL-6），ALP和Ⅰ型胶原（COL-Ⅰ） mRNA的表达。结果：CCK8结果显示，随着时间的增长，MC3T3-E1增殖虽无统计学差异，但呈上升趋势，而在20 mg·L^-1浓度时增殖较其他组明显；ALP和ARS染色结果显示，成骨诱导组和龟甲水提液联合成骨诱导组染色阳性率较空白组明显升高；Real-time PCR结果显示，龟甲干预第7天，与空白组比较，龟甲水提液联合成骨诱导组NF-κB p105和IL-6 mRNA的表达明显降低（P<0.01），ALP和COL-Ⅰ mRNA的表达明显升高（P<0.05）；龟甲干预第14天，与空白组比较，龟甲水提液联合成骨诱导组NF-κB p65，NF-κB p105和IL-6 mRNA的表达明显降低（P<0.01），ALP和COL-Ⅰ mRNA的表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论：龟甲水提液能够促进MC3T3-E1成骨分化，其机制可能与抑制NF-κB炎性微环境有关。