【摘 要】
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对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带。连
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,甘肃省医学科学研究院医学生物中心,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
【基金项目】
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公益性科研院所基本科研业务费专项资金（BRF090402）
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对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带。连接转化至克隆载体pMD18-T,测序正确后连接表达载体pET-30a（＋）,酶切和PCR鉴定正确后转化至BL21（DE3）,构建重组质粒pET-30a-hlyA。IPTG诱导表达蛋白,并分析其可溶性。PCR扩增的hlyA基因全长约1 600 bp,成功构建了重组质粒pET-30a-hlyA,转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白,SDS-P
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