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摘要：研究并建立了鸡饲料中角黄素、虾青素等5种类胡萝卜素的超高效液相色谱分析法。采用乙腈提取饲料样品后，将提取液直接进行进样分析。色谱柱为Waters BEH C18 （1.7 m，2.1 mm×100 mm）；流动相为0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液，采用梯度洗脱；检测波长450 nm；流速0.25 mL/min。结果表明，5种类胡萝卜素在 50～500 ng/mL范围内呈良好的线性关系，检测限为0.01～0.10 mg/kg，定量限为0.03～0.40 mg/kg，回收率80%～105%，精密度小于15%，说明超高效液相色谱分析法操作简便，适宜用于测定鸡饲料中的类胡萝卜素。
关键词：类胡萝卜素；饲料；超高效液相色谱
中图分类号： O657.7+2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0273-03
收稿日期：2013-12-04
基金项目：江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目（编号：NY-062）。
作者简介：曲斌（1979—），男，辽宁盘锦人，博士，兽医师，研究方向为兽药残留分析新技术与新方法。E-mail：[email protected]。类胡萝卜素（carotenoids）是一类聚异戊二烯类天然色素，广泛存在于植物、动物和微生物中，其分子结构中含有大量的共轭双键，在分子链的末端具有线性或环状基团，末端基团、含氧官能团以及氢化作用的强弱不同产生了大量结构不同的类胡萝卜素，常见的有虾青素（astaxanthin）、角黄素（canthaxanthin）、β-阿朴-8′-胡萝卜醛（β-apo-8′-carotenal）、β-隐黄素（β-cryptoxanthin）、β-胡萝卜素（β-carotene）等[1]。类胡萝卜素具有抑制多不饱和脂肪酸的氧化、改善视力、提高免疫力、促进色素形成等重要的生物学功能，目前常被添加到禽类或水产动物的饲料中来改善禽蛋产品或水产品的色泽，使其具有诱人的颜色，从而提高产品的商业价值。近年来，不法商家为了谋求经济利益超量使用类胡萝卜素，使得某些产品中类胡萝卜素添加过量，而科学研究也发现，过量食用类胡萝卜素对人体具有一定的副作用，特别是其中的角黄素，因此，欧盟修正了角黄素的最大残留限量值为15 mg/kg（除蛋鸡外的家禽肝脏）、30 mg/kg（蛋鸡蛋黄）[2]、8 mg/kg （产蛋母鸡用饲料）[3]。我国农业部第1126号公告仅规定允许角黄素、虾青素、β-胡萝卜素等在家禽或水产动物中使用，但未明确提出饲料中的允许限量[4]。因此，从源头控制产品质量，建立饲料中类胡萝卜素的分析测定方法具有重要意义。本研究采用高效液相色谱分析法测定三黄鸡饲料中的类胡萝卜素类色素添加剂，以期建立鸡饲料中类胡萝卜素的多种组分测定方法。
1材料与方法
1.1试验仪器
超高效液相色谱仪（UPLC）：Waters Acquity 超高效液相色谱系统（含高压二元泵、自动进样器、柱温箱、TUV紫外可见波长检测器、Empower2数据处理系统）；KS 501振荡器，IKA公司；Sigma 3K30离心机，Sartorius公司。
1.2材料与试剂
对照品：虾青素、角黄素、β-阿朴-8′-胡萝卜醛、β-隐黄素、β-胡萝卜素，Sigma公司、Dr. Ehrenstorfer公司；色谱纯乙腈，Fisher公司；色谱纯甲酸，Tedia公司；分析纯乙腈，南京化学试剂有限公司；化学纯2，6-二叔丁基对甲酚（BHT），百灵威公司；纯净水；PTFE（30 mm×0.45 μm）针式过滤器，National Scientific公司。
1.3试验方法
1.3.1对照品溶液的配置取适量上述5种对照品，精确称定后置于棕色容量瓶中，用含1%BHT的丙酮溶解并稀释定容，得100 g/mL的对照品溶液，于-18 ℃避光保存。
1.3.2工作液的配置取适量对照品溶液，用乙腈稀释，分别制得50、100、150、200、250、375、500 ng/mL的工作液。
1.3.3色谱条件色谱柱：Waters BEH C18柱，1.7 μm，2.1 mm×100 mm；流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：01%甲酸乙腈溶液；梯度洗脱：0→5 min，90% B→90% B，5→6 min，90% B→95%B，6→13 min，95%B→95%B，13→135 min，95%B→100%B，13.5→40 min，100%B→100%B，40→40.5 min，100%B→90%B，40.5→45 min，90%B→90%B，流速0.25 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10 μL；检测波长：450 nm。
1.3.4工作曲线按工作液浓度由小到大依次在UPLC进样分析，以色谱峰面积对浓度作图，计算线性方程和回归系数。
1.3.5样品处理称取5 g鸡饲料样品，置于50 mL聚丙烯离心管中，加入20 mL乙腈，高速振荡30 min，5 ℃、10 000 r/min 离心5 min，取上清液，经0.45 μm PTFE微孔滤膜过滤至进样瓶中，UPLC分析测定。
2结果与分析
2.1专属性分析
5种类胡萝卜素对照品溶液的色谱图见图1，空白饲料的色谱图见图2，饲料中阳性添加的色谱图见图3，某批次真实检出的饲料样品的色谱图见图4。
2.2标准曲线
5种类胡萝卜素的标准曲线线性方程见表1。
关键词：类胡萝卜素；饲料；超高效液相色谱
中图分类号： O657.7+2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0273-03
收稿日期：2013-12-04
基金项目：江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目（编号：NY-062）。
作者简介：曲斌（1979—），男，辽宁盘锦人，博士，兽医师，研究方向为兽药残留分析新技术与新方法。E-mail：[email protected]。类胡萝卜素（carotenoids）是一类聚异戊二烯类天然色素，广泛存在于植物、动物和微生物中，其分子结构中含有大量的共轭双键，在分子链的末端具有线性或环状基团，末端基团、含氧官能团以及氢化作用的强弱不同产生了大量结构不同的类胡萝卜素，常见的有虾青素（astaxanthin）、角黄素（canthaxanthin）、β-阿朴-8′-胡萝卜醛（β-apo-8′-carotenal）、β-隐黄素（β-cryptoxanthin）、β-胡萝卜素（β-carotene）等[1]。类胡萝卜素具有抑制多不饱和脂肪酸的氧化、改善视力、提高免疫力、促进色素形成等重要的生物学功能，目前常被添加到禽类或水产动物的饲料中来改善禽蛋产品或水产品的色泽，使其具有诱人的颜色，从而提高产品的商业价值。近年来，不法商家为了谋求经济利益超量使用类胡萝卜素，使得某些产品中类胡萝卜素添加过量，而科学研究也发现，过量食用类胡萝卜素对人体具有一定的副作用，特别是其中的角黄素，因此，欧盟修正了角黄素的最大残留限量值为15 mg/kg（除蛋鸡外的家禽肝脏）、30 mg/kg（蛋鸡蛋黄）[2]、8 mg/kg （产蛋母鸡用饲料）[3]。我国农业部第1126号公告仅规定允许角黄素、虾青素、β-胡萝卜素等在家禽或水产动物中使用，但未明确提出饲料中的允许限量[4]。因此，从源头控制产品质量，建立饲料中类胡萝卜素的分析测定方法具有重要意义。本研究采用高效液相色谱分析法测定三黄鸡饲料中的类胡萝卜素类色素添加剂，以期建立鸡饲料中类胡萝卜素的多种组分测定方法。
1材料与方法
1.1试验仪器
超高效液相色谱仪（UPLC）：Waters Acquity 超高效液相色谱系统（含高压二元泵、自动进样器、柱温箱、TUV紫外可见波长检测器、Empower2数据处理系统）；KS 501振荡器，IKA公司；Sigma 3K30离心机，Sartorius公司。
1.2材料与试剂
对照品：虾青素、角黄素、β-阿朴-8′-胡萝卜醛、β-隐黄素、β-胡萝卜素，Sigma公司、Dr. Ehrenstorfer公司；色谱纯乙腈，Fisher公司；色谱纯甲酸，Tedia公司；分析纯乙腈，南京化学试剂有限公司；化学纯2，6-二叔丁基对甲酚（BHT），百灵威公司；纯净水；PTFE（30 mm×0.45 μm）针式过滤器，National Scientific公司。
1.3试验方法
1.3.1对照品溶液的配置取适量上述5种对照品，精确称定后置于棕色容量瓶中，用含1%BHT的丙酮溶解并稀释定容，得100 g/mL的对照品溶液，于-18 ℃避光保存。
1.3.2工作液的配置取适量对照品溶液，用乙腈稀释，分别制得50、100、150、200、250、375、500 ng/mL的工作液。
1.3.3色谱条件色谱柱：Waters BEH C18柱，1.7 μm，2.1 mm×100 mm；流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：01%甲酸乙腈溶液；梯度洗脱：0→5 min，90% B→90% B，5→6 min，90% B→95%B，6→13 min，95%B→95%B，13→135 min，95%B→100%B，13.5→40 min，100%B→100%B，40→40.5 min，100%B→90%B，40.5→45 min，90%B→90%B，流速0.25 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10 μL；检测波长：450 nm。
1.3.4工作曲线按工作液浓度由小到大依次在UPLC进样分析，以色谱峰面积对浓度作图，计算线性方程和回归系数。
1.3.5样品处理称取5 g鸡饲料样品，置于50 mL聚丙烯离心管中，加入20 mL乙腈，高速振荡30 min，5 ℃、10 000 r/min 离心5 min，取上清液，经0.45 μm PTFE微孔滤膜过滤至进样瓶中，UPLC分析测定。
2结果与分析
2.1专属性分析
5种类胡萝卜素对照品溶液的色谱图见图1，空白饲料的色谱图见图2，饲料中阳性添加的色谱图见图3，某批次真实检出的饲料样品的色谱图见图4。
2.2标准曲线
5种类胡萝卜素的标准曲线线性方程见表1。