滇姜花中滇姜花素A的含量测定

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  摘 要 建立滇姜花(Hedychium yunanense)中呋喃二萜类成分滇姜花素A的含量分析方法。方法:C18柱,流动相为水:甲醇(2∶8),流速1.0ml/min,检测波长233nm。结果:滇姜花素A的线性范围Y=1.4672X-2.8651(r=0.999),平均加样回收率98.7%,精密度RSD=2.88%(n=5)。结论:本方法简单、有效、可行,可用于滇姜花素A的含量测定。
  关键词 滇姜花 滇姜花素A HPLC
  
  滇姜花(Hedychium yunnanense)为姜科姜花属植物,民间药用以根为主,本品辛、温,具有驱风除湿、舒筋活络、调经止痛的功效。主要用于风湿痹痛,慢性腰腿痛,跌打损伤,月经不调,虚寒不孕等症。主要分布于云南[1]。目前对该民族药的质量研究有限,严启新等[2]首次报道了滇姜花的主成分姜花酮(hedychenone)的含量测定方法。基于前人的研究,作者对滇姜花中的呋喃二萜类成分滇姜花素A的含量进行测定,建立了该成分的含量分析方法,为该药材的进一步研究开发提供了依据。
  


  
  1 仪器和材料
  
  对照品为自提,经检测纯度达99%以上(归一法),实验用水为纯净水(杭州娃哈哈集团),甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司)。
  所有药材样品均采自昆明市西山区、官渡区,经昆明植物研究所童绍全研究员鉴定为滇姜花(Hedychium yunnanense)。
  高效液相色谱仪DIONEX系列(德国产)包括P680二元泵、Rheodyne7725i手动进样器、UVD170U检测器、TCC-100柱温箱、25μl微量进样器,万分之一电子天平(BOSCH SAE200 日本产)。
  2 方法和结果
  2.1 色谱条件:色谱柱Dimension C18柱(DIKMA公司 150mm×4.6mm),柱温25℃,流动相水:甲醇(2∶8),流速1.0ml/min,检测波长233nm,保留时间19.0min。
  2.2 标准曲线的绘制:精密称取对照品滇姜花素A 5.0mg定容于25ml容量瓶中,摇匀,作为储备液,分别吸取该储备液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml定容于10ml容量瓶中,按上述色谱条件进行HPLC分析。以对照品溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行回归计算,Y=1.4672-2.8651(r=0.999),表明滇姜花素A在4.0~20.0μg/ml有良好的线性关系。
  2.3 检测波长测定:精密称取对照品1.0mg,用水:甲醇(2∶8)溶解,并定容于10ml容量瓶中,摇匀,以水:甲醇(2∶[KG-*5]8)作空白对照,在200~400nm进行扫描,可见在233nm处有最大吸收,故检测波长选定为233nm。
  2.4 样品溶液的制备:精密称定滇姜花药材粉末(过40目筛)100mg,以30ml甲醇回流提取2小时,提取液过滤,滤液加甲醇定容至50ml,摇匀,吸取8ml,定容至10ml,作为样品测定液。
  2.5 精密度考察:精密吸取对照品溶液25μl(μg/ml),重复进样5次,测定吸收峰面积,RSD=2.88%,结果表明精密度良好。
  2.6 重复性实验:取同一滇姜花药材末5份,精密称定,按“样品含量测定”项下操作,以2.1项的色谱条件测定,计算含量,RSD=3.6%。
  2.7 稳定性考察:精密吸取同一样品溶液,分别在0,2,4,6,8,10,12,20,24小时测定,峰面积积分计算RSD=2.2%。
  2.8 加样回收实验:精密称取已知含量的药材粉末100mg,共7份,分别加入对照品溶液0.8ml(0.5mg/ml),结果见表1。对照品平均加样回收率98.7%,表明分析方法准确。
  2.9 样品含量测定:吸取2.4项下样品测定溶25μL,进行HPLC测定,记录峰面积,外标法计算含量,滇姜花素A的含量为0.413%。
  
  3 讨论
  
  滇姜花素A为呋喃二萜类成分,初步药理研究表明具有抗肿瘤活性[3,4],通过药材中滇姜花素A的含量研究,建立了该组分的含量分析方法,且方法简单、有效、可行,该分析方法的建立,在今后的滇姜花药物资源开发利用方面具有重要的参考价值,为滇姜花的系统研究打下了基础。
  
  参考文献
  
  1 中国科学院昆明植物研究所.云南植物志.北京:教育科学出版社,1997.11
  2 严启新,叶晓雯,赵庆,等.滇姜花中姜花酮的含量测定.中国中药杂志,2005,30(20):1593.
  3 赵庆,郝小江,陈耀祖,等.滇姜花中新二萜成分研究.高等学校化学学报,1995,16(1):64.
  4 赵庆,郝小江,陈耀祖,等.滇姜花抗肿瘤活性二萜及其光敏氧化反应的研究.植物学报,1999,41(5:)528.
  (收稿日期:2007年1月14日)
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