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【摘 要】 本实验在是教师的指导下以学生为主体完成实验的全过程，要求学生了解实验原理、做好实验计划及设计、准备好动物（家兔），对动物分组并分三个阶段对其实施免疫同时做好抗体滴度测试记录、掌握动物（家兔）的心脏采血、血清分装、对实验过程中容易出现的问题能加以说明。通过本实验增强学生的科学实验能力及敏锐的观察能力，端正他们求是务实的态度。了解了抗体制备的全过程，亦为教师及实验技术人员的实验教学进行了有益的尝试。
【关键词】 抗血清 制备 实验教学 探索
【文献编码】 doi:10.3969/j.issn.0450-9889（C）.2010.02.057
在免疫学的诸多实验如肥达氏试验、病原学诊断等中，都需要大量的动物免疫血清。尤其是肥达氏试验，它是目前临床上诊断伤寒病、付伤寒病的主要检测手段之一，学生必须熟练地掌握它，要开展这些实验，需大量阳性标本。而在实验教学中购买阳性血清价格昂贵，每做一次实验耗资达1 000元以上，在此之前，也曾制备过免疫血清，但使用的免疫原是伤寒、付伤寒的沙门氏菌，需要进行免疫原的制备，而在这过程中要使学生自己操作具有潜在的传染性。本次实验我们采用了从生物制品所购置的沙门氏菌标准诊断菌液作为免疫原，既保证了免疫原的纯度（特异性），又彻底避免了实验过程中的潜在传染性；通过实验，学生充分了解了抗体制备的全过程，同时获得了大量的高效价抗体，为学校节约了实验资金，亦为今后的其他免疫学实验创造了必要的条件。
一、 实验原理
利用伤寒沙门氏菌（O.H诊断菌液）、甲型付伤寒沙门氏菌（O.PA诊断菌液）、乙型付伤寒沙门氏菌（O.PB诊断菌液）、丙型付伤寒沙门氏菌（O.PC诊断菌液）作为免疫原、免疫动物，从而获得相应的抗体（IgG为主）。
二、 实验计划及设计
免疫原：TOPA：H PC：C T PB：H 五种免疫原。
免疫对象：家兔（12只分4组，每组3只）。
免疫时间共28天：
第一次：2009年6月1日；
第二次：2009年6月11日；
第三次：2009年6月25日。
血清抗滴度测定时间：
第一次：2009年6月9日；
第二次：2009年6月23日；
第三次：2009年6月28日。
血清分离，分装：2009年6月28日。
三、 实验材料
实验材料包括：
器材：注射器、碘酊、棉球、手术剪。
动物：家兔（12只）。
四、 计划实施
要求雄性健康每只3 kg以上。免疫原为购置的沙门氏菌诊断菌液，由教师指导学生制作免疫流程表，并要求学生作好记录。
表1
五、 抗体滴度的测定记录
表2
注: 抗体滴度（效价）是指抗体反应出现凝集时，凝集出现++时血清的最高稀释倍数定为该抗原抗体的凝集效价。
抗体滴度的测定过程：第一，取一大试管加入生理盐水3.8 ml，然后加入待测血清0.2 ml，使血清稀释度为1∶20。第二，取试管7支，置试管架，给每管加入生理盐水0.5 ml。第三，取1∶20的血清0.5 ml加入第二支试管内混匀，使其稀释度为1∶40。第四，如此类推：1～6号试管的稀释度分别是：1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶646、1∶1280。第五，诊断菌液分别加入1～6号试管，每管0.5 ml，最终稀释度为1∶80 、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280、1∶2560。第六，混匀振荡后置水浴箱，次日观察结果。第七；效价判断：以出现++凝集管的血清稀释度作为该抗原抗体反应的凝集效价。
表3 抗体效价测定
六、 血清的分离、动物采血、分装、备用
（一） 动物采血
家兔的采血一般为心脏采血，采血过程中必须注意如下几点：
1.在第一次、第二次采血时（测试抗体效价）采血量不能超过5ml，每组只采一只（由指导教师采血）。
2.采血过程中，采血针头切记不能在心脏中移动，以保证家兔的生命安全。
3.采血过程中，注意动物皮肤消毒以防感染。
4.采血试管最好是10 cm长试管，以便分离血清。
5. 采血完毕，待血液在试管中凝固后，速放37℃水浴箱内以便血清分离。
6. 待血块自然收缩凝固后，立即进行离心以免由于时间过长造成溶血。
7. 两只兔子的血不能放入一支试管以免造成溶血。
8. 最后一次采血，每只不能少于40ml，将每只采完为止，第一次采血不成功时待动物休息一段时间，一直到采到血为止。
（二） 分装备用
1. 整个采血过程，包括容器都要进行无菌操作。
2. 选用5 ml无菌试剂瓶，每小瓶事先注入小量防腐剂（0.1%叠氮钠）。
3. 用无菌技术吸取血清注入加有防腐剂的小瓶中。
4. 贴好标签：抗血清名称、分装日期等。
七、 结果及结果分析
根据抗体产生的规律：初次应答和再次应答、第一次测试抗体效价免疫时间为10天，血清效价为：
TO：1∶320 PA:H1∶320PB:H 1∶320PC:H 1∶320
第二次测试和第三次测试抗体的滴度比第一次测试滴度明显增高，这是与理论相符的；第一次免疫出现抗体时间长、抗体量少、抗体分子以Igm为主，在体第内维持时间较短；第二次和第三次免疫属加强免疫，此时抗体产生时间快（2～3天）、维持时间长、抗体分子以IgG为主。
根据以上规律，在本实验过程中，免疫时间：第一次、第二次、第三次免疫的时间设计是很讲究的，所以在第三次免疫后的第三天作动物采血，此时抗体效价应最理想。本次实验已达到预期目标，效果满意。
八、 本实验过程中应注意的几点
第一，动物分笼饲养，最好是一只兔子一个笼子，以免造成相互撕咬给对方造成伤害。
第二，动物饲养过程中应保证：饲料卫生清洁、任务落实、注意观察做好登记。
第三，抗体测定时用每一组的一只兔子即可，这样可以基本估计到各组兔子血清效价值。
第四，最后一次采血、采血量越多越好，每只兔采血量不能少于40 ml。
第五，采血的容器、注射器，必须消毒处理，整个过程注意无菌操作。
第六，在血清分离过程中避免各种原因引起的溶血。
【作者简介】 唐玉龙（1962- ），桂林市卫生学校免疫学讲师。
（责编 何田田）
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
【关键词】 抗血清 制备 实验教学 探索
【文献编码】 doi:10.3969/j.issn.0450-9889（C）.2010.02.057
在免疫学的诸多实验如肥达氏试验、病原学诊断等中，都需要大量的动物免疫血清。尤其是肥达氏试验，它是目前临床上诊断伤寒病、付伤寒病的主要检测手段之一，学生必须熟练地掌握它，要开展这些实验，需大量阳性标本。而在实验教学中购买阳性血清价格昂贵，每做一次实验耗资达1 000元以上，在此之前，也曾制备过免疫血清，但使用的免疫原是伤寒、付伤寒的沙门氏菌，需要进行免疫原的制备，而在这过程中要使学生自己操作具有潜在的传染性。本次实验我们采用了从生物制品所购置的沙门氏菌标准诊断菌液作为免疫原，既保证了免疫原的纯度（特异性），又彻底避免了实验过程中的潜在传染性；通过实验，学生充分了解了抗体制备的全过程，同时获得了大量的高效价抗体，为学校节约了实验资金，亦为今后的其他免疫学实验创造了必要的条件。
一、 实验原理
利用伤寒沙门氏菌（O.H诊断菌液）、甲型付伤寒沙门氏菌（O.PA诊断菌液）、乙型付伤寒沙门氏菌（O.PB诊断菌液）、丙型付伤寒沙门氏菌（O.PC诊断菌液）作为免疫原、免疫动物，从而获得相应的抗体（IgG为主）。
二、 实验计划及设计
免疫原：TOPA：H PC：C T PB：H 五种免疫原。
免疫对象：家兔（12只分4组，每组3只）。
免疫时间共28天：
第一次：2009年6月1日；
第二次：2009年6月11日；
第三次：2009年6月25日。
血清抗滴度测定时间：
第一次：2009年6月9日；
第二次：2009年6月23日；
第三次：2009年6月28日。
血清分离，分装：2009年6月28日。
三、 实验材料
实验材料包括：
器材：注射器、碘酊、棉球、手术剪。
动物：家兔（12只）。
四、 计划实施
要求雄性健康每只3 kg以上。免疫原为购置的沙门氏菌诊断菌液，由教师指导学生制作免疫流程表，并要求学生作好记录。
表1
五、 抗体滴度的测定记录
表2
注: 抗体滴度（效价）是指抗体反应出现凝集时，凝集出现++时血清的最高稀释倍数定为该抗原抗体的凝集效价。
抗体滴度的测定过程：第一，取一大试管加入生理盐水3.8 ml，然后加入待测血清0.2 ml，使血清稀释度为1∶20。第二，取试管7支，置试管架，给每管加入生理盐水0.5 ml。第三，取1∶20的血清0.5 ml加入第二支试管内混匀，使其稀释度为1∶40。第四，如此类推：1～6号试管的稀释度分别是：1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶646、1∶1280。第五，诊断菌液分别加入1～6号试管，每管0.5 ml，最终稀释度为1∶80 、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280、1∶2560。第六，混匀振荡后置水浴箱，次日观察结果。第七；效价判断：以出现++凝集管的血清稀释度作为该抗原抗体反应的凝集效价。
表3 抗体效价测定
六、 血清的分离、动物采血、分装、备用
（一） 动物采血
家兔的采血一般为心脏采血，采血过程中必须注意如下几点：
1.在第一次、第二次采血时（测试抗体效价）采血量不能超过5ml，每组只采一只（由指导教师采血）。
2.采血过程中，采血针头切记不能在心脏中移动，以保证家兔的生命安全。
3.采血过程中，注意动物皮肤消毒以防感染。
4.采血试管最好是10 cm长试管，以便分离血清。
5. 采血完毕，待血液在试管中凝固后，速放37℃水浴箱内以便血清分离。
6. 待血块自然收缩凝固后，立即进行离心以免由于时间过长造成溶血。
7. 两只兔子的血不能放入一支试管以免造成溶血。
8. 最后一次采血，每只不能少于40ml，将每只采完为止，第一次采血不成功时待动物休息一段时间，一直到采到血为止。
（二） 分装备用
1. 整个采血过程，包括容器都要进行无菌操作。
2. 选用5 ml无菌试剂瓶，每小瓶事先注入小量防腐剂（0.1%叠氮钠）。
3. 用无菌技术吸取血清注入加有防腐剂的小瓶中。
4. 贴好标签：抗血清名称、分装日期等。
七、 结果及结果分析
根据抗体产生的规律：初次应答和再次应答、第一次测试抗体效价免疫时间为10天，血清效价为：
TO：1∶320 PA:H1∶320PB:H 1∶320PC:H 1∶320
第二次测试和第三次测试抗体的滴度比第一次测试滴度明显增高，这是与理论相符的；第一次免疫出现抗体时间长、抗体量少、抗体分子以Igm为主，在体第内维持时间较短；第二次和第三次免疫属加强免疫，此时抗体产生时间快（2～3天）、维持时间长、抗体分子以IgG为主。
根据以上规律，在本实验过程中，免疫时间：第一次、第二次、第三次免疫的时间设计是很讲究的，所以在第三次免疫后的第三天作动物采血，此时抗体效价应最理想。本次实验已达到预期目标，效果满意。
八、 本实验过程中应注意的几点
第一，动物分笼饲养，最好是一只兔子一个笼子，以免造成相互撕咬给对方造成伤害。
第二，动物饲养过程中应保证：饲料卫生清洁、任务落实、注意观察做好登记。
第三，抗体测定时用每一组的一只兔子即可，这样可以基本估计到各组兔子血清效价值。
第四，最后一次采血、采血量越多越好，每只兔采血量不能少于40 ml。
第五，采血的容器、注射器，必须消毒处理，整个过程注意无菌操作。
第六，在血清分离过程中避免各种原因引起的溶血。
【作者简介】 唐玉龙（1962- ），桂林市卫生学校免疫学讲师。
（责编 何田田）
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文