探讨miR-370-3p、β-连环蛋白(β-catenin)在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤细胞株U251恶性增殖的相关性。
方法(1)收集武汉大学人民医院神经外科自2014年9月至2015年3月手术切除的20例胶质瘤组织和同期行减压术切除的10例正常脑组织标本，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-370-3p表达，Western blot检测β-catenin蛋白表达，并对胶质瘤组织中两者表达进行相关性分析。(2)将体外培养的U251细胞分别转染miRNA无义序列和miR-370-3p模拟物，48 h后RT-qPCR检测细胞中miR-370-3p、β-catenin mRNA表达，Western blot检测β-catenin蛋白表达。(3)双荧光素酶实验检测miR-370-3p对β-catenin编码基因CTNNB1基因的靶向调控作用。(4)细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆形成实验综合评估转染后细胞的增殖能力。(5)共转染miR-370-3p模拟物与β-catenin pcDNA3质粒进行逆转实验进一步分析两者之间的功能联系。
结果(1)miR-370-3p在人脑胶质瘤中表达低于正常脑组织，且miR-370-3p在低级别胶质瘤(Ⅰ级和Ⅱ级)、高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)胶质瘤中的表达量逐渐降低(对照组比低级别组比高级别组：3.67±1.65比4.94±1.08比2.37±1.11)，与β-catenin蛋白表达呈负相关(R2＝0.886 8)，差异有统计学意义。(2)与无义序列转染组比较，miR-370-3p模拟物转染组U251细胞中miR-370-3p表达显著增加(模拟物转染组比阴性对照组：174.33±23.08比1.03±0.30)，β-catenin mRNA表达无明显改变，但β-catenin蛋白表达明显降低。双荧光素酶实验结果显示，转染miR-370-3p后野生型报告质粒的荧光素酶活性较对照组降低约40%，且差异有统计学意义(P＝0.021)。(3)上调miR-370-3p表达后，U251细胞增殖能力较对照组明显降低，克隆形成能力减弱(模拟物转染组比阴性对照组：30.00±7.00比63.33±4.04；P＝0.004)。(4)逆转实验结果发现，上调β-catenin的表达可以部分逆转miR-370-3p对U251细胞的生长抑制现象(miR-ctrl＋CTNNB1组比miR-370-3p＋vector组比miR-370-3p＋CTNNB1组：78.33±6.03比31.33±4.51比63.00±5.57)。
结论miR-370-3p可以通过转录后调控β-catenin，抑制胶质瘤细胞U251恶性生长。