【摘 要】
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目的 通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型,探讨p15对胆管癌细胞增殖的影响.方法将抑癌基因p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA-neo中的EcoRⅠ/XbaⅠ位点,构建成p15真核表达质粒pcDNA3p15;通过脂质体法将pcDNA3p15质粒传染人胆管癌细胞系QBC939,经G418筛选,获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的对照细胞模型,并
【机 构】
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210029,南京医科大学第一附属医院普外科,210029,南京医科大学第一附属医院普外科,南京医科大学生化与分子生物学系,南京医科大学生化与分子生物学系,210029,南京医科大学第一附属医院普外科
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目的 通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型,探讨p15对胆管癌细胞增殖的影响.方法将抑癌基因p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA-neo中的EcoRⅠ/XbaⅠ位点,构建成p15真核表达质粒pcDNA3p15;通过脂质体法将pcDNA3p15质粒传染人胆管癌细胞系QBC939,经G418筛选,获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的对照细胞模型,并经Wistern分子杂交分析证实.结果与对照组相比,p15高表达的人胆管癌细胞生长速率明显下降,第4天细胞增殖结果被抑制了38.6%;克隆形成能力降低,克隆抑制率达55%;S期的细胞明显减少,G1期、G2期的细胞均有增加;癌基因c-myc蛋白水平低.结论在人胆管癌细胞中高表达抑癌基因p15抑制了细胞增殖;p15同时阻遏细胞由G1期向S期及G2期向M期转换;癌基因c-myc蛋白水平降低可能是p15抑制作用的分子机理之一。
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