【摘 要】
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目的克隆铜绿假单胞菌PAO1株的LexA蛋白编码区，在大肠杆菌中表达并纯化表达蛋白。方法提取铜绿假单胞菌PAO1株基因组DNA，PCR扩增LexA蛋白编码区，A—T克隆于质粒pMD18-T载体中。
【机 构】
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第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所,第三军医大学附属新桥医院医学实验技术中心
【基金项目】
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重庆市自然科学基金（2004BB5045）
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目的克隆铜绿假单胞菌PAO1株的LexA蛋白编码区，在大肠杆菌中表达并纯化表达蛋白。方法提取铜绿假单胞菌PAO1株基因组DNA，PCR扩增LexA蛋白编码区，A—T克隆于质粒pMD18-T载体中。阳性重组子经酶切后，回收目的片段连接至相应线性化的表达型载体pET-28a（＋）中，重组质粒经测序鉴定后，转化大肠杆菌BL21感受态，筛选高效表达株，表达产物经SDS-PAGE初步鉴定后，用镍珠吸附一步法纯化，表达蛋白转印PVDF膜后，经N-端测序证实。结果本研究成功克隆到PAO1株的LexA蛋白编码区并在大肠杆
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