miR-101靶向调节ZEB1对胃癌细胞上皮间质转化及化疗敏感性的影响

来源 :中华内分泌外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yongren803
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目的:探讨微小RNA(miR)-101靶向调节锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)及化疗敏感性的影响。方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(不做处理)、顺铂组(8 μmol/L顺铂)、mimic NC组(8 μmol/L顺铂+转染negative control-miR-101)、miR-101 mimic组(8 μmol/L顺铂+转染hsa-miR-101 mimic)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组MGC-803细胞中miR-101、ZEB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(Fibronectin)mRNA表达情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-101与ZEB1的靶向作用关系;蛋白印迹(WB)法检测各组MGC-803细胞中相关蛋白表达情况;CCK-8法检测各组MGC-803细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组MGC-803细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,顺铂组MGC-803细胞中miR-101、E-cadherin mRNA及蛋白表达水平、细胞凋亡率显著升高[(1.01±0.09)vs(1.25±0.08),(1.00±0.10)vs(1.37±0.12),(0.26±0.04)vs(0.49±0.07),(6.85±0.95)% vs(15.44±1.12)%,(n P<0.05)],ZEB1、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin mRNA及蛋白表达水平、细胞OD值显著降低[(1.02±0.10)vs(0.82±0.08),(1.02±0.08)vs(0.73±0.09),(0.98±0.09)vs(0.79±0.09),(0.99±0.08)vs(0.66±0.09),(0.59±0.06)vs(0.30±0.05),(n P<0.05)];与mimic NC组相比,miR-101 mimic组MGC-803细胞中miR-101、E-cadherin mRNA及蛋白表达水平、细胞凋亡率显著升高[(1.26±0.08)vs(1.57±0.10),(1.35±0.11)vs(1.66±0.11),(0.51±0.09)vs(0.68±0.09),(16.12±1.05)% vs(39.97±1.84)%,(n P<0.05)],ZEB1、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin mRNA及蛋白表达水平、细胞OD值显著降低[(0.84±0.08)vs(0.65±0.07),(0.76±0.09)vs(0.55±0.08),(0.75±0.08)vs(0.61±0.07),(0.65±0.07)vs(0.47±0.07),(0.31±0.05)vs(0.22±0.04)(n P<0.05)]。n 结论:miR-101可能通过靶向抑制ZEB1表达,抑制MGC-803细胞EMT过程,并提高癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性。“,”Objective:To investigate the effects of microRNA (miR) -101 targeting zinc-finger E-box binding homeobox 1 (ZEB1) on epithelial-mesenchymal transition (EMT) and chemosensitivity of gastric cancer cells.Methods:Human gastric cancer MGC-803 cells were cultured in vitro and divided into control group (without treatment) , cisplatin group (8 μmol/L cisplatin) , mimic NC group (8 μmol/L cisplatin + negative control-miR-101) and miR-101 mimic group (8 μmol/L cisplatin + hsa-miR-101 mimic) . The expressions of miR-101, ZEB1, E-cadherin, N-cadherin, Vimentin and Fibronectin mRNAs in MGC-803 cells were detected by real-time fluorescent quantitative PCR (qRT-PCR) ; the double luciferase reporter gene experiment was used to confirm the targeting relationship between miR-101 and ZEB1; the expressions of related proteins in MGC-803 cells were detected by Western blot; the proliferation of MGC-803 cells was detected by CCK-8 method; and the apoptosis of MGC-803 cells was detected by flow cytometry.Results:Compared with those in the control group, the mRNA and protein expression levels of miR-101 and E-cadherin, and apoptosis rate of MGC-803 cells in cisplatin group were significantly higher (n P<0.05) , and the mRNA and protein expression levels of ZEB1, N-cadherin, vimentin and fibronectin, cell OD value were significantly lower (n P<0.05) ; meanwhile, compared with those in mimic NC group, the mRNA and protein expression levels of miR-101 and E-cadherin, and apoptosis rate of MGC-803 cells in miR-101 mimic group were significantly higher (n P<0.05) , and the mRNA and protein expression levels of ZEB1, N-cadherin, vimentin and fibronectin, cell OD value were significantly lower (n P<0.05) .n Conclusion:MiR-101 may inhibit the EMT process of MGC-803 cells and increase the sensitivity of cancer cells to cisplatin by targetingly inhibiting the expression of ZEB1.
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